Primera evidencia de una proteína tipo glutaredoxina en Entamoeba histolytica

BIROCCO, F.; GONZÁLEZ, LIHUE N.; GUERRERO, SERGIO A.; IGLESIAS, ALBERTO A.; ARIAS, DIEGO G.

Congreso; XXXII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2020

PRIMERA EVIDENCIA DE UNA PROTEÍNA DE TIPO GLUTAREDOXINA EN ENTAMOEBA HITOLYTICABirocco, F; Guerrero, SA; Iglesias, AA; Arias, DGLaboratorio de Enzimología Molecular ? IAL (CONICET- UNL) ? Santa Fe (3000) - Argentina.E-mail: francobirocco@gmail.comEl parásito intestinal Entamoeba histolytica es el agente causal de la amebiasis. Este protozoo usualmente vive y se multiplica en el interior del intestino humano, un ambiente con presión de oxígeno reducida. Sin embargo, durante la invasión a tejidos, E. histolytica se encuentra expuesta a cantidades elevadas de especies reactivas del oxígeno (ROS) exógenas, lo que resulta altamente tóxico para el patógeno. Las vías metabólicas para la detoxificación de ROS en este organismo son controversiales, no se ha detectado la presencia de glutatión ni de enzimas asociadas a su metabolismo. Es por ello que se ha propuesto a la cisteína como el principal tiol intracelular y uno de los compuestos responsable del mantenimiento del balance redox intracelular. En este trabajo, presentamos la caracterización funcional de una proteína de tipo glutaredoxina monotiólica de E. histolytica (EhGrx1). Ensayos bioquímicos mostraron que EhGrx1 fue capaz de catalizar la reducción in vitro de disulfuros de baja masa molecular derivados de GSH y cisteína. La proteína obtenida por expresión recombinante en Escherichia coli presentó una estructura apo-monomérica; sin embargo, una forma holo-proteica se obtuvo mediante complementación del medio de cultivo con citrato férrico y cisteína. La habilidad de unir centros ferrosulfurados (ISCs) fue evaluada por espectroscopía UV-Vis y cromatografía de filtración por gel, evidenciando que EhGrx1 podría unir ISC. La actividad Grx no fue detectable para la holo-EhGrx1, sugiriendo que su residuo catalítico de cisteína estaría involucrado en la unión de ISC. También evaluamos por western blot la abundancia relativa de EhGrx1 en células de E. histolytica expuestas a agentes oxidantes exógenos y a metronidazol (fármaco de preferencia para el tratamiento de la amebiasis). Los resultados mostraron que los niveles de proteína se incrementan respecto al de las células no tratadas, observándose un comportamiento similar en el análisis de localización subcelular por microscopía de inmunofluorescencia confocal, llevado a cabo para diferentes condiciones oxidantes. A su vez, bioensayos de toxicidad realizados con cultivos de E. coli recombinante mostraron diferencias significativas en el IC50 para H2O2 comparando entre las células expresantes respecto de las no expresantes. Estos resultados en conjunto, sugieren que EhGrx1 podría estar involucrada en la protección frente a estrés oxidativo y nitrosativo en este parásito. Para nuestro entender y saber, esta es la primera caracterización de este tipo de proteínas en E. histolytica.Financiado por ANPCyT (PICT2016-1778 y PICT2017-2268).