SLUG REGULA LA EXPRESIÓN DE MICRORNAS EN CÉLULAS MUSCULARES LISAS

LAUTARO NATALI ; BENJAMÍN THEA DE LA CRUZ; MICOL RUIZ PAEZ; XIMENA VOLPINI; GUNTER MEISTER; MELINA MARA MUSRI

Córdoba

Congreso; XXII Jornadas Científicas Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Sociedad de Biología de Córdoba

El Remodelado Vascular (RV) es un proceso activo que contribuye a la fisiopatología de enfermedades. Las alteraciones fenotípicas de las células que componen las arterias juegan un papel preponderante en el desarrollo de RV. Los cambios más estudiados son la conversión de células endoteliales a células mesenquimales por un proceso de transición de endotelio a mesenquima (EnMT), la de-diferenciación de células musculares lisas (CML) de la media, y la proliferación de fibroblastos de la capa adventicia. Se ha demostrado que Slug, un factor de transcripción de la familia Snail, participa del proceso de EnMT. En trabajos previos, nuestro grupo ha reportado que Slug promueve la de-diferenciación y proliferación de CML. En adición, reportamos que la expresión de Slug es significativamente mayor en arterias pulmonares con alto RV, lo cual sugiere su participación durante este proceso. Sin embargo, hasta el momento se desconoce el rol de Slug en la diferenciación de fibroblastos a miofibroblastos y los mecanismos subyacentes a la regulación de la diferenciación de CML. Los microARNs (miARNs) son pequeños ARN no codificantes que regulan de manera postranscripcional la expresión de ARN mensajeros. Los miARNs están implicadas en la regulación de estados fisiológicos, patológicos y su expresión está alterada en arterias con RV. Teniendo en cuenta estos antecedentes, el objetivo de este trabajo fue evaluar la expresión de Slug durante la diferenciación de CML y de fibroblastos a miofibroblastos inducida por TGF-β. Asimismo, nos propusimos evaluar si Slug es capaz de regular la expresión de miARNs. Se utilizaron CML derivadas de arterias pulmonares humanas y fibroblastos humanos MRC5, las cuales fueron incubadas con 2nM de TGF-β o vehículo. Posteriormente se analizó la expresión de Slug y de marcadores contráctiles mediante PCR a tiempo real. En CML se analizó la expresión de miARNs por secuenciación masiva de pequeños ARN, luego de la inhibición de la expresión de Slug mediante la transfeccion de un siPool específico y de un siControl. La expresión de miRNAs candidatos fue validada mediante Northern Blot. Nuestros resultados mostraron que Slug disminuye significativamente en ambos tipos celulares luego de 24h y 48h posteriores al tratamiento con TGF-β. El análisis de datos de la sequenciación arrojó un cambio significativo en la expresión de un gran número de miRNAs en CML transfectadas con siSlug respecto a siControl. Se validó específicamente el aumento de la expresión de miR-let7a, miR-23 y miR-10a, miARNs implicados en la regulación de la proliferación. En conclusión, nuestros resultados demuestran que Slug disminuye en respuesta a TGF-β tanto en CML como en fibroblastos. En CML, Slug regula la expresión de miR-let7a, miR-23 y miR-10a. Estos hallazgos contribuyen nuevas evidencias al conocimiento de la fisiopatología del RV y de mecanismos que podrían promover nuevas estrategias de diagnóstico de enfermedades relacionadas.