ESTUDIO DE LA PARTICIPACIÓN DE CELULAS MUSCULARES LISAS EN EL REMODELADO VASCULAR PULMONAR CON EL USO DE SEGUIMIENTO DE LINAJE IN VIVO

NATALI, LAUTARO; DE LA CRUZ-THEA, BENJAMÍN; RUIZ PAEZ, MICOL; VOLPINI, XIMENA; OWENS, GARY K.; MUSRI, MELINA M.

Río Cuarto

Jornada; XXIV JORNADAS CIENTÍFICAS SOCIEDAD DE BIOLOGÍA DE CÓRDOBA; 2021

Sociedad De Biología de Córdoba

El Remodelado Vascular (RV) tiene un rol crítico en enfermedades cardiopulmonares como la hipertensión pulmonar (HP), una enfermedad compleja, progresiva y fatal. El RV pulmonar se caracteriza por el aumento de rigidez de arterias elásticas, el engrosamiento de la capa íntima y/o media de arterias musculares y la muscularización de arteriolas distales. Es ampliamentereconocido que la excesiva desdiferenciación y proliferación de las células musculares lisas (CML) vasculares son claves en el desarrollo de RV, aunque su estudio in vivo ha constituido un desafío debido a que la pérdida de marcadores específicos ocurre durante etapas tempranas de este proceso. Recientemente se han desarrollado técnicas de seguimiento de linaje celular que permiten identificar CML bona fide incluso luego de su desdiferenciación. Galectina-3 (Gal-3) es una proteína de la familia de las lectinas que participa de la regulación de procesos como la proliferación, migración, fibrosis e inflamación, y que ha sido implicada en el desarrollo de HP. Sinembargo, no está completamente definida la identidad celular donde Gal-3 se expresa durante el desarrollo de HP. En este estudio utilizamos un ratón transgénico de seguimiento de linaje dual Myh11 DRE2 tdTomato-Lgals3-CRE-eGFP+/+ capaz de marcar con tdTomato las células que han expresado la cadena pesada de miosina de músculo liso (Myh11, marcador específico de CML) y con eGFP las CML que han expresado Lgals3, el gen que codifica para Gal-3. Estos ratones fueron divididos en 3 grupos: ratones sin tratar (control), ratones sometidos a hipoxia, y ratones sometidos a hipoxia y tratados con SU5416, un inhibidor del receptor de VEGF, reproduciendo un establecido modelo de HP. Se analizó la expresión de eGFP y tdTomato en pulmón mediante inmunofluorescencia y citometría de flujo (n=9), y se realizó una secuenciación de RNA de células individuales (scRNAseq) de CML de pulmones de ratones control (n=3). Nuestros resultados muestran una presencia abundante de CML de vías aéreas y vasculares que han expresado Lgals3 y un aumento en la intensidad media de fluorescencia de eGFP pero no en el número de células eGFP+ en ratones con HP. Se encontró un aumento significativo de células tdTomato+ en arterias de mayor calibre de ratones con HP. El scRNAseq reveló un total de 18 clusters de células, de los cuales 4 fueron identificados como CML vasculares y 2 como CML de vías aéreas. Interesantemente se encontraron otros clusters con marcadores de macrófagos, de células mesenquimales alveolares y de células endoteliales. En conclusión, este estudio demuestra con métodos novedosos la participación de CML vasculares en el desarrollo de RV pulmonar y establece un posible vínculo entre la expresión de Gal-3 y el desarrollo de HP mediado por las CML. Además, se observó que las CML pulmonares se transdiferencian a tipos celulares específicos en condiciones normales como ya ha sido descrito en otros vasos del árbol vascular.