Caracterización genética y validación funcional de genes candidatos en girasol y su relevancia en la respuesta al patógeno Sclerotinia sclerotiorum

LIA VV; PELUFFO L; BERACOCHEA V; FUSARI CM; PANIEGO NB; HOPP E; BARRETO D; VAZQUEZ ROVERE C; HEINZ RA

Mar del Plata

Taller; Taller Pre-Congreso del Quinto Congreso Argentino de Girasol, ASAGIR 2010; 2010

ASAGIR

Las proteínas de tipo germinas (GLPs) están involucradas en los mecanismos de defensa frente a patógenos fúngicos y bacterianos en un amplio rango de especies vegetales. El objetivo de este trabajo consistió en caracterizar estructuralmente las GLPs de girasol mediante la secuenciación de sus transcriptos completos y regiones genómicas correspondientes y estudiar su intervención en la respuesta al patógeno S. sclerotiorum a través de ensayos de desafío en plantas transgénicas de A. thaliana que sobre-expresen los distintos miembros de esta familia multigénica (HaGLPs). Las cinco GLPs analizadas presentaron una región codificante de entre 209 y 220 aminoácidos, en tres de ellas interrumpidas por un intrón (HaGLP1, HaGLP2, HaGLP5). Los patrones de diversidad nucleotídica fueron evaluados en un conjunto de líneas endocriadas, observándose un alto grado de conservación para HaGLP1 y niveles variables en las cuatro GLPs restantes. Para el análisis funcional, se realizaron dos construcciones para la sobre-expresión de HaGLP1 (con y sin intrón) y se obtuvieron 10 líneas transgénicas de A. thaliana por cada una de ellas. La expresión del transgen se confirmó por RT-PCR. Los ensayos de desafío frente al patógeno fueron llevados a cabo en condiciones controladas por inoculación con micelio en hojas sin herida, registrándose tamaño de la lesión y porcentaje de planta afectada por un período de siete días. Los resultados preliminares mostraron un rápido progreso de la infección en las líneas transgénicas y en los controles no transgénicos, acompañado de una alta variabilidad en el tipo de lesión tanto dentro como entre las líneas.