Actividad Neutralizante del Calostro de vacas Inmunizadas con toxina Shiga tipo 2 sobre la Accion de la Toxina en Lineas Celulares derivadas de Riñón e Instestino

ADRIANA A. ALBANESE; RAVINOVITZ B; GALARZA R; CATALDI A; MERCADO E; IBARRA C

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunion Anual de la Saic-Safis y XLV Reunión Anual de la Safe; 2013

SAIC-SAFIS-SAFE

ACTIVIDAD NEUTRALIZANTE DEL CALOSTRO DE VACAS INMUNIZADAS CON TOXINA SHIGA TIPO 2 SOBRE LA ACCION DE LA TOXINA EN LINEAS CELULARES DERIVADAS DE RIÑON E INTESTINO. Adriana Albanese1, Bettina Rabinovitz2, Roxana Galarza3, Angel Cataldi4, Elsa C. Mercado2, Cristina Ibarra1. 1Laboratorio de Fisiopatogenia, Departamento de Fisiología, Facultad de Medicina, UBA. 2Instituto de Patobiología, 3Estación Experimental Agropecuaria Rafaela e 4Instituto de Biotecnología, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA).adrianaandreaalbanese@gmail.com Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es el patógeno emergente con mayor impacto en los alimentos, siendo su principal reservorio el ganado bovino. La infección en humanos puede ser directa, vía productos cárnicos o lácteos, o indirecta, por la excreción fecal en el medio ambiente. STEC puede causar diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). El SUH es endémico en Argentina con una incidencia de 10-15 casos/100.000 niños menores de 5 años, siendo la primera causa pediátrica de insuficiencia renal aguda y la segunda de insuficiencia renal crónica. El SUH está asociado con la actividad citotóxica de las toxinas Shiga tipo 1 y 2 (Stx1, Stx2), siendo E. coli O157:H7 el serotipo asociado con mayor frecuencia. El objetivo del presente trabajo fue determinar y caracterizar anticuerpos presentes en el calostro de vacas Holstein inmunizadas con 100 µg/dosis de Stx2 (Phoenix, USA) inactivada 10 min a 75ºC, a 40 y 20 días preparto empleando el adyuvante W/O/W ISA206 (Seppic, Francia). Muestras de calostro se recogieron al momento del parto y se deslipidizaron. Se analizó la presencia de anticuerpos IgG anti-Stx2 por Western blot y se determinó la capacidad neutralizante del calostro sobre la acción citotóxica de Stx2 en cultivos de células Vero y HCT-8, derivadas de epitelio renal e intestinal, respectivamente. Los cultivos celulares fueron inoculados con la toxina preincubada durante 1 h con diluciones seriadas de calostro. Se determinó la viabilidad de las células tratadas a las 72 hs mediante la incorporación de Rojo Neutro. El calostro hiperinmune en la dilución 1/1000 fue capaz de neutralizar 1DC50 de Stx2 (DC50: dosis citotóxica que reduce la viabilidad celular al 50%). Se demostró la presencia de anticuerpos IgG específicos anti-subunidad A de Stx2 por Western blot. Los resultados abren la perspectiva de desarrollo de una leche hiperinmune o de cápsulas de calostro para ser usados con nutracéticos en niños con riesgo de contraer SUH.