Evaluación del crecimiento de un adenocarcinoma de mama en ratones CBi/L en función de la integridad y el tamaño del inóculo

CAPELLO GARDENAL, MARÍA CELESTE; PAGURA LUCAS; CARDINALE ALBERTINA; SCHAROVSKY O. GRACIELA; DI MASSO RICARDO JOSÉ, ROZADOS VIVIANA ROSA; RICO, MARÍA JOSÉ

Rosario,Santa Fe

Congreso; XIV Congreso y XXXII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2012

La línea de ratón CBi se mantiene en el Instituto de Genética Experimental de la Facultad de Ciencias Médicas como control de un experimento de selección artificial por conformación corporal. M-406 es un adenocarcinoma de mama, semidiferenciado, tipo B, que en 1996 surgió espontáneamente en una hembra de la línea CBi y, desde entonces, se mantiene in vivo por injertos intraperitoneales (i.p.) en su huésped singeneico. El tumor muestra diferente comportamiento en la línea de origen y en dos líneas derivadas de la misma: CBi- y CBi/L. En CBi el tumor presenta 100% de toma, 0% de regresión y 100% de letalidad. En CBi-, por su parte, muestra 100% de toma y 100% de regresión. Cuando se desafían animales CBi/L se observa 100% de toma y, a continuación, algunos tumores crecen tornándose letales mientras que otros regresan y son eliminados. La observación del comportamiento diferencial del tumor en las líneas derivadas de CBi llevó a postular la hipótesis que, como respuesta correlacionada a la selección practicada o bien como consecuencia de la acción de procesos dispersivos, estas tres líneas habrían fijado genes que determinan diferentes tipos de respuesta inmune frente al tumor. Pese a la heterogeneidad celular del inóculo, la respuesta inmune montada por los animales CBi- no permitiría el crecimiento tumoral salvo en un estadio muy inicial (resistencia). Los ratones CBi, en cambio, montarían una respuesta inmune incapaz en todos los casos de detener la progresión del tumor (susceptibilidad). En la línea CBi/L el tumor crece en forma exponencial en algunos animales (Escape), es eliminado (Eliminación) en otros y en un tercer grupo entra en un estado de equilibrio (Equilibrio) en el que no modifica su tamaño hasta que finalmente retoma el crecimiento (Escape) o bien es rechazado (Eliminación), comportamiento asimilable a las tres etapas de la inmunoedición tumoral, o teoría de las tres ?E. En ensayos previos llevados a cabo para evaluar si la respuesta inmune desarrollada en la línea CBi (susceptible) o en la línea CBi- (resistente) dependía del tamaño o integridad del inóculo, se observó que en la línea CBi desafiada con trócar Grupo I: (tres fragmentos ≈8x105 células tumorales totales) y con inóculos de células tumorales en suspensión en número decreciente: Grupo II: 8x105 células; Grupo III: 4x105 células; Grupo IV: 2x105 células, no existieron diferencias significativas entre grupos ni en el tiempo de duplicación del volumen tumoral (k) ni en el valor de inicio (Start), dos parámetros del modelo exponencial creciente que describe el comportamiento del volumen del tumor en función del tiempo transcurrido desde el desafío. Por otro lado, el volumen tumoral al día 32 post-desafío mostró un patrón decreciente (GI>GII>GIII>GIV), lo que indica que la integridad del inóculo (GI: desafío con trócar) posibilitó un crecimiento más acelerado del tumor y que, independientemente del mantenimiento o no de la integridad del tumor, CBi fue incapaz de montar una respuesta inmune eficaz ante el adenocarcinoma M-406. Por otro lado en la línea resistente, ante el desafío con trócar (Grupo I) o con suspensiones tumorales crecientes de 8x105 células (Grupo II), 16x105 células (Grupo III) y 32x105 células (Grupo IV), se observó que si bien el tamaño (número de células) del inóculo se vinculó con el tiempo de portación (a mayor número de células mayor tiempo requerido para el rechazo del tumor), los animales CBi- son capaces en todos los casos de montar una respuesta inmune que impide el crecimiento del adenocarcinoma de mama M-406, hecho que corrobora la condición de resistencia de la línea ante el desafío con este tipo particular de tumor. Con el objetivo de evaluar si la línea CBi/L presenta los tres estadios de crecimiento tumoral independientemente del tamaño del inóculo y su integridad, se inocularon ratones CBi/L con trocar (Grupo I) y con tres suspensiones crecientes de M-406: Grupo II: 2x105 células, Grupo III: 8x105 células y Grupo IV 32x105 células (n=11 por grupo). Teniendo en cuenta que la línea CBi/L presenta animales resistentes y susceptibles se eligieron las concentraciones máximas y mínimas evaluadas previamente en las líneas testigos CBi (susceptible) y CBi- (resistente) y la dosis de 8x105 que corresponde al número de células que se inocula con trocar. Durante el experimento se evaluó el crecimiento tumoral, con calibre, tres veces por semana y se determinó el porcentaje de animales que se presentaron en cada una de las fases (escape, equilibrio y eliminación) de crecimiento tumoral. A pesar de las diferencias observadas entre los grupos éstas no alcanzaron significado estadístico con respecto al número de animales que presentaron cada una de las fases de crecimiento tumoral. La condición de crecimiento tumoral fue independiente del tamaño e integridad del inóculo (X2 = 8,183; P = 0,2250). Se observa que el grupo que recibió un inóculo mayor fue el que presentó una mayor proporción de animales en Escape y el que recibió un menor número de células presentó una mayor proporción de animales en Eliminación, presentando la dosis intermedia valores intermedios. Cuando se analizaron cada una de las fases se observó que: en Eliminación, en los animales que recibieron un inóculo superior (Grupo IV) el volumen tumoral máximo y el tiempo de portación del tumor fue mayor, sin alcanzar significado estadístico. En Escape, no se observaron diferencias en los tiempos de duplicación en los distintos grupos experimentales analizados. Se concluye que en la línea CBi/L: 1) se presentan los tres estadios de inmunoedición tumoral independientemente del tamaño del inóculo y su integridad; 2) en Escape la velocidad de crecimiento tumoral, evaluada a través del tiempo medio de duplicación es la misma, independientemente de la integridad o tamaño del inóculo; 3) en Eliminación, cuanto mayor es el inóculo mayor es el volumen tumoral alcanzado y se requiere un mayor tiempo para eliminarlo. Estos resultados confirman la evidencia previa que permite postular al sistema CBi/L M-406 como un modelo adecuado para el estudio de la teoría de las tres ?E? o inmunoedición tumoral.