ABORDAJE PARA LA DETECCIÓN DE CAMBIOS NUCLEOTÍDICOS EN EL GEN CD27 Y SUS NIVELES DE EXPRESIÓN EN PACIENTES CON MIELOMA MÚLTIPLE

LANNUTTI LUCAS; LOPRESI SERGIO; GUASH GISELLA LETICIA; STELLA FLAVIA

Jornada; Jornadas de Ciencia de Técnica; 2018

El mieloma múltiple (MM), es una neoplasia de células plasmáticas, caracterizada por infiltración >10% en medula ósea (MO) de plasmocitos clonales y producción de una paraproteína monoclonal. La forma sintomática está definida por los criterios CRAB (Hipercalcemia, Insuficiencia Renal, Anemia, Lesiones óseas), y tres biomarcadores: infiltración ≥60%, Ratio de Cadenas Livianas Libres ≥100 y más de una lesión focal por Resonancia Magnética Nuclear. Estudios genéticos han permitido catalogar regiones cromosómicas involucradas. Entre las anomalías cromosómicas descriptas, encontramos las deleciones en el brazo corto del cromosoma 12 (12p), localización del gen CD27. La proteína CD27 es un receptor que se expresa en un subgrupo de células B, involucrada en la apoptosis de células hematopoyéticas. En MM, los niveles de CD27 son heterogéneos, pudiendo detectarse una disminución en su expresión, como consecuencia de una desregulación transcripcional o debido una deleción de 12p, asimismo, se han reportado en este gen cambios nucleotídicos con implicancias clínicas. Nuestro objetivo es analizar cambios en la secuencia y expresión del gen CD27, para esclarecer su relación en la evolución de pacientes con MM. Se cuenta con muestras de MO de pacientes con MM anticoaguladas con EDTA, previstas para extracciones de ADN y ARN. Se realizará QRT-PCR, para cuantificar los niveles de expresión; PCR y posterior secuenciación del promotor, exón 1 y 2. Para el diseño de primers, se obtuvo acceso a la secuencia de ADN (NC_000012.12) y ARNm (NM_001242.4) del repositorio NCBI. Se usó para la búsqueda de primers el programa Primer3. La temperatura de melting óptima fue fija en 59?61°C y un largo deseado entre 200-500nb para PCR y 150-250nb en QRT-PCR. En el caso particular de la retrotranscripción se trabajó con la secuencia del ARNm. Para garantizar la especificidad de los primers su largo se fijó entre 22-24nb y comprobó mediante BLAST. A la fecha, fueron seleccionados tres pares de primers para PCR y un par para QRT-PCR. Resumidamente, los pasos a seguir serán: la extracción de material genómico, puesta a punto de las PCRs y análisis de resultados, tendiente a comprender el significado clínico del status de CD27 en la patogénesis del MM