Persistencia de modelos virales en matrices acuosas sintéticas que representan condiciones ambientales regionales

CORIMAYO SN; MAIDANA-KULESZA MN; GUTIÉRREZ-CACCIABUE D; RAJAL VB; POMA HR

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología.; 2019

Asociación Argentina de Microbiología

La persistencia de los microorganismos en ambientes acuáticos es un factor crucial que incideen el riesgo de que una población sufra efectos adversos para la salud. Esta persistencia depende decaracterísticas del ambiente acuático como: contenido de materia orgánica y de partículas sólidas,conductividad, radiación solar y temperatura, entre otros. En este sentido, el objetivo de este trabajofue comparar la persistencia de P22 (fago de {Salmonella Typhimurium}) y PP7 (fago de {Pseudomonasaeruginosa}) en matrices acuosas sintéticas que representen diferentes condiciones ambientales,empleando técnicas de detección tradicional y metodologías moleculares.Se recolectaron y clasificaron por tamaño sólidos del lecho del río Wierna (Salta); se seleccionópara este experimento la fracción más pequeña encontrada (<0,074 mm). Se prepararon matricesacuosas sintéticas con Buffer Fosfato Salino (PBS). Se realizó la propagación y titulación de dos modelosvirales: P22 con genoma de ADN y PP7 con genoma de ARN. Éstos se sembraron en concentracionesconocidas en las matrices acuosas preparadas las que se sometieron a distintas condicionesambientales. Se seleccionaron dos concentraciones de sedimentos (0,5 y 5 g/l), dos conductividades(0,15 y 1,5 mS/cm) y dos temperaturas (12 y 25 °C) para simular condiciones ambientales regionalesdeterminadas en estudios previos. Se tomaron muestras de la superficie de las matrices a distintostiempos para observar la cinética de inactivación y/o sedimentación. Luego de un tiempo se realizó unaresuspensión de los sedimentos y se tomó una última muestra. La cuantificación se realizó por técnicastradicionales (recuento de placas de lisis) para estimar la infectividad de los fagos y metodologíasmoleculares (qPCR en tiempo real) para determinar la persistencia de los ácidos nucleicos en lasmatrices estudiadas.La presencia de sedimentos en las matrices sintéticas expuestas a 25 °C produjo unadesaparición más rápida de ambos fagos infectivos y un menor recuento de sus genomas, encomparación con las matrices a 12 °C. Valores elevados de conductividad incrementaron la persistenciadel fago PP7 pero no de P22. El recuento de fagos no aumentó después de la resuspensión. El ADNgenómico de P22 fue más persistente que los fagos infectivos, mientras que la persistencia del ARNgenómico de PP7 fue semejante a la de sus partículas infectivas.Estos resultados sugieren que no es necesario monitorear virus en los sedimentos deambientes acuáticos de nuestra región, ya que la presencia de sólidos en estos ambientes, no tiene unainfluencia en la supervivencia y acumulación de los virus en los lechos de cuerpos acuáticos. En unesquema de monitoreo ambiental para virus de ADN se necesitará confirmar infectividad mediante eluso métodos microbiológicos tradicionales, en cambio para virus de ARN, el empleo de métodosmoleculares será suficiente para detectarlos y estudiar su persistencia.