Rol de los microARNs durante la especificación y diferenciación de la cresta neural.

STEEMAN, TOMÁS J.; CALCATERRA, NORA B.; WEINER, ANDREA M.J.

Chascomús

Taller; IV Taller de Biología Celular y del Desarrollo; 2018

La cresta neural (NC) es una población transitoria de células multipotentes cuya formación ocurre temprano en el desarrollo. Cuando el tubo neural se cierra, las células de la NC (NCC) sufren una transición epitelio-mesénquima para delaminar, migrar hacia distintas regiones del embrión y diferenciarse en una gran variedad de derivados, incluyendo células con pigmento, huesos y cartílagos de la cabeza, entre otros. Cada etapa del desarrollo de las NCC está caracterizada por la activación transcripcional de factores de transcripción particulares y fundamentales. Dichos factores funcionan en complejas redes de regulación génica (GRN) junto con modificadores de cromatina y ARN no-codificantes, incluyendo lncARNs y microARNs. Siendo escasa la información sobre la participación de los microARNs en las vías de regulación, nuestro objetivo es contribuir al conocimiento de la GRN mediada por microARNs durante el desarrollo de las NCC. Al disminuir los niveles de dicer1 (enzima encargada de la biosíntesis de los microARNs) en embriones mutantes de pez cebra o mediante el uso de un Morpholino específico (Dicer1-MO), se afectan el patrón de pigmentación y el desarrollo craneofacial. Embriones transgénicos psox10:GFP tratados con Morpholino-Dicer1 revelan un patrón diferente de las NCC precursoras de melanocitos, al compararlos con los contro- les. Mediante RT-qPCR e hibridación in situ se analizaron los niveles y patrones de expresión de Sox10, Mitfa y las enzimas melanogénicas, evidenciando una desregulación de los mismos. Tinciones con Alcian Blue mostraron de- fectos en las estructuras craneofaciales en larvas depletadas de Dicer1, posiblemente debido a la expresión alterada del factor sox9b (medidos por RT-qPCR). Además, embriones tratados con Dicer1-MO muestran un incremento en los niveles de apoptosis en las NCC y una sobreexpresión del gen proapoptótico BIM, el cual se sabe que está regulado por miR-17. El análisis in silico de las regiones 3?UTR de los ARNm que codifican Sox10, Mitfa y Sox9b contienen sitios de unión a microARNs conservados posiblemente involucrados en el control de la expresión de estos genes. El desarrollo de nuevos experimentos permitirá evaluar el rol de microARNs específicos en las GRN que gobiernan la especificación y diferenciación de las NCC.