Identificación de miARNs involucrados en el desarrollo de la cresta neural

STEEMAN, TOMÁS J.; WEINER, ANDREA M. J.; RUBIOLO, JUAN A.; SÁNCHEZ, LAURA E.; CALCATERRA, NORA B.

Taller; Taller de Biología del Desarrollo; 2022

La cresta neural (CN) es una población celular multipotente transitoria que da lugar a un linaje celular altamente variado. Su formación comienza temprano en el desarrollo, en el borde del tubo neural. Una vez cerrado el tubo neural, las células de la CN (CCN) atraviesan un proceso denominado transición epitelio-mesénquima (TEM), lo cual les permite migrar dorsoventralmente hacia diferentes regiones del embrión donde finalmente se diferenciarán en distintos tipos celulares. El rol de reguladores post-transcripcionales, como los microARNs, en el desarrollo de la CN es aún campo de estudio. Los microARNs son moléculas de ARN cortas que se unen a las regiones 3’UTR de sus ARNm blanco, inhibiendo la traducción o promoviendo la degradación del mensajero. Además, al ser capaces de regular a más de un gen, se postuló que más de la mitad de los genes están regulados por microARNs. Con el objetivo de identificar microARNs involucrados en la GRN de la CN, se realizó un experimento de Cell Sorting seguido de RNA-seq, utilizando pez cebra como organismo modelo. Utilizando una línea transgénica que expresa GFP bajo el control del promotor de sox10, se separaron las CCN del resto de las células de embriones de 16 y 30hpf y se aislaron y secuenciaron los ARNs pequeños presentes en cada una de esas poblaciones celulares. El análisis de los datos permitió identificar microARNs sobre-representados en CCN. Luego de una búsqueda bibliográfica y bioinformática, se seleccionaron tres microARNs para realizar ensayos de sobreexpresión y evaluar el efecto de estos microARNs en el desarrollo de diferentes estructuras derivadas de la CN. Los resultados sugieren que los miARNs analizados están involucrados en el desarrollo craneofacial, al haberse observado una disminución en los ángulos de los cartílagos de la mandíbula inferior, así como una alteración en la longitud de estos cartílagos, evidenciado mediante tinción de Alcian Blue. Sin embargo, el patrón de células pigmentadas no se ha visto modificado. El desarrollo de nuevos experimentos nos permitirá evaluar si estos defectos se deben a una alteración de la migración de las CCN luego de la TEM, así como dilucidar el mecanismo de estas alteraciones.