OBTENCION DE VESICULAS EXTRACELULARES A PARTIR DE SOBRENADANTES DE FIBROBLASTOS ASOCIADOS A CANCER DE MAMA ESTIMULADOS CON COMPONENTES NUTRICIONALES DE PATRONES DIETARIOS DE CORDOBA

SOLLA ERICA D.; ROLDÁN GALLARDO F.F.; QUINTAR AA

LA PLATA

Congreso; 7 CONGRESO DE MICROSCOPIA ARGENTINO SAMIC 2022; 2022

Numerosas evidencias señalan una fuerte asociación entre componentes nutricionales y el desarrollo y mantenimiento de procesos tumorales. En Cordoba, se describió que la mayor adherencia a patrones dietarios (PD) provistos por alimentos ricos en carbohidratos y ácidos grasos saturados, representados principalmente por fructosa (F) y ácido palmitico (AP) respectivamente, se encuentra asociado de manera positiva al riesgo de cáncer colorrectal y de mama. Sin embargo, no se conocen completamente los mecanismos celulares por los cuales estos componentes promoverian mayor agresividad tumoral. La forma de comunicación intercelular mediada por vesiculas extracelulares (EVs) ha cobrado relevancia recientemente debido a la amplitud de funciones que pueden desempeñar. Estas estructuras se pueden clasificar según su tamaño por microscopia electrónica de transmision (MET) e inmunocitoquimica ultraestructural en: exosomas (30-100 nm) y microvesiculas (100-1000 nm), Es importante señalar que las EVS liberadas, tanto por las células tumorales como del entorno, pueden ser reguladas por ácidos grasos presentes en los PD agravando, por ejemplo, el proceso de transicion epitelio mesenquimal en cáncer de mama. Nuestro objetivo fue evaluar in vitro el rol de las componentes dietarios (Fy AP) en la liberacion de EVS por parte de fibroblastos asociados al cancer (CAF). Para ello, celulas CAFS de la linea 188 de adenoma mamario humano fueron cultivadas en medio DMEM con 10 SEB y estimuladas con F 40 mM, AP 250 UM, combinaciones de ambos (F+AP) o con vehiculo, por 24 horas (concentraciones caracteristicas de PD de Córdoba). Posteriormente, se colectaron sobrenadantes y se aislaron EVs a traves de centrifugaciones y ultracentrifugaciones secuenciales (2k, 10k 100k), Las EVs fueron abservadas por MET con tincion negativa para su caracterización (tamaño y forma) y evaluadas para marcador de EVs CD63 mediante inmunomarcación can oro coloidal. Células tumorales epiteliales de mama de la linea MCF7 fueron cultivadas en medio DMEM con 10% SFB y posteriormente estimuladas con los medios condicionados provenientes de las celulas F88 por 24 horas. Los estimulos aislados no provocaron cambios estadisticamente significativos en la liberación de EVs, aunque la combinacion F+AP si indujo un mayor incremento en el numero de EVs obtenidas al ser observadas por MET. Tampoco hubo diferencias significativas entre F y AP de manera individual. Se pudo observar la forma cóncava, característica principal de los exosomas. El mayor numero de EVs se encontro es el rango de 20-30nm de tamaño, sin que los tratamientos alteraran significativamente este rango. Por otro lado, las celulas MCF7 al ser estimuladas con medios condicionados tratados con F+AP mostraron un incremento en la proliferación celular (ANOVA, p