NUEVA TÉCNICA DE MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO PARA COCCOIDEA (INSECTA: HEMIPTERA)

SARACHO BOTTERO, MARÍA ANDREA; CLAPS, LUCÍA ELENA; MELCHERT, NICOLÀS ALEJANDRO; CARDIELLO, MARÍA GABRIELA

San Miguel de Tucumán

Jornada; XII Jornadas de Comunicaciones Facultad de Ciencias Naturales e IML II Interinstitucionales Facultad de Ciencias Naturales e IML Fundación Miguel Lillo; 2015

Facultad de Ciencias Naturales e IML

La taxonomía de las ?cochinillas? (Hemiptera: Coccoidea) se basa en caracteres que aportan las hembras adultas, debido a que son las que tienen más caracteres estables a nivel específico. Los caracteres morfológicos estudiados mediante microscopía óptica (MO), resultan muchas veces insuficientes para una correcta y completa caracterización de las especies, debido a que son organismos muy pequeños, de dos a siete mm, y porque presentan estructuras muy delicadas, tales como distintos tipos de conductos, setas, poros, espinas, etc. los cuales son muchas veces difíciles de observar a MO, al igual que es difícil reconocer si dichas estructuras se encuentran en las superficies ventral o dorsal. La microscopía electrónica de barrido (MEB) se utiliza para obtener imágenes de gran resolución de los caracteres superficiales de los objetos, permite visualizar las imágenes haciendo interaccionar un haz primario de electrones sobre un área del objeto en estudio, en este caso, el insecto. Las técnicas para las preparaciones a MEB empleadas para muchos insectos, entre ellos las Coccoidea, en su mayoría incluyen un primer paso de fijación del material en glutaraldehído y una posfijación con tetróxido de osmio, deshidratación en serie de alcoholes y secado mediante punto crítico. El objetivo del presente trabajo es poner a punto las técnicas de MEB para Coccoidea, empleando como base especies de Dactylopiidae y Pseudococcidae. El material con el que se trabajó corresponde a hembras adultas y ninfas de Dactylopius spp. (Dactylopiidae) e Hypogeococcus spp. (Pseudococcidae) conservado en alcohol 70º, 96º, y material fresco recolectado por los autores. Se utilizó Microscopio Zeiss Supra 55 VP del Centro Integral de Microscopía Electrónica (CIME) Tucumán. Se realizaron tres ensayos diferentes: 1) Técnica convencional sin modificaciones consistente en: material fresco, fijación en formaldehído glutaraldehído, posfijación con tetróxido de osmio, deshidratación con alcoholes y acetona y secado con punto crítico; 2) Muestras fijadas en campo con alcohol 96° y luego siguiendo el protocolo convencional y 3) Muestras fijadas en campo con alcohol 96°, hasta con cinco años de fijación, limpiadas con xilol y acetona y llevadas directamente a la etapa de hidratación y una posterior deshidratación, omitiendo la fijación en formaldehido gluteraldehído y las posfijación en tetróxido de osmio. Se observa que la etapa de posfijación con tetróxido de osmio no es recomendable ni necesaria para este grupo de insectos, ya que en la mayoría de los casos se produce un daño y contracción de la cutícula, hasta romper la pared del cuerpo. El mejor resultado se lo obtiene omitiendo la fijación en formaldehido gluteraldehído y las posfijación en tetróxido de osmio. Es importante destacar que el material a observar debe estar completamente limpio, para ello el xilol y acetona son los mejores medios para eliminar la materia grasa que posee la seda que envuelve a estos insectos y no afecta al cuerpo ni cutícula del mismo. Asimismo es primordial que el punto crítico se realice correctamente a fin de mantener la turgencia de los ejemplares a observar.