Caracterización y análisis molecular de deleciones en 400 pacientes con diagnóstico clinico de distrofia muscular de Duchenne/Becker.

V FERREIRO, F GILIBERTO, LIFRANCIPANE, FRECHTEL

Buenos Aires

Congreso; 11 Congreso Internacional del Hospital de Clínicas; 2008

Hospital de Clinicas

La distrofia muscular de Duchenne (DMD) es una de las enfermedades hereditarias más frecuentes (1:3500). Es recesiva, ligada al X, progresiva y de evolución fatal. La distrofia muscular de Becker (DMB) es menos frecuente y más leve. Las DMD/DMB se deben a mutaciones, principalmente grandes deleciones, en el gen de la distrofina (locus Xp21). La diferencia molecular entre las DMD/DMB es la presencia (DMD) o ausencia (DMB) de corrimiento del marco de lectura (CML). En la actualidad no existe ningún tratamiento conocido que cure la DMD, ni que evite el deterioro muscular. La demanda cada vez más imperiosa del hallazgo de una cura, promovió que en la actualidad se establecieran numerosas líneas de investigación en el campo de la terapia génica. La más prometedora es el uso de oligonucleótidos antisentido (OAS). Mediante la hibridación con un OAS de una secuencia blanco en el ARNm se ha tratado de restaurar el marco de lectura a expensas de la pérdida de secuencias codificantes. El objetivo del presente trabajo es caracterizar deleciones en los pacientes con diagnóstico clínico de DMD/DMB y predecir cuál sería el mejor blanco para la terapia génica antisentido que permitiría transformar el fenotipo DMD en DMB o incluso en asintomático en el mayor número de pacientes. Se analizaron 400 pacientes con diagnóstico clínico de DMD/DMB y 3 individuos asintomáticos. La identificación de la deleción se realizó por PCR multiplex, utilizando 4 reacciones cuadruplex para la amplificación de 16 exones. La confirmación de la presencia de una deleción y el análisis de su extensión se realizó por medio de PCR simplex de los exones faltantes y de los contiguos a los mismos. Se verificó la conservación del marco de lectura mediante el análisis de la secuencia resultante luego del empalme de los exones flanqueantes a la deleción. Con el fin de evaluar cuántas de las deleciones con CML en pacientes con DMD serían rescatadas mediante una terapia de salteo de exones, se seleccionaron y analizaron las deleciones sin CML encontradas sólo en los pacientes con fenotipo de DMB. Con este diagrama de trabajo se hallaron deleciones en 186 pacientes, en 106 de ellos fue posible interpretar las consecuencias fenotípicas de las alteraciones moleculares halladas (22 sin CML y 84 con CML). De las 22 deleciones sin CML, la que abarca los exones 45-55 resultó el mejor blanco para la terapia génica antisentido. Se propone la deleción de los exones 45-55 como mejor candidata para el desarrollo de una única estrategia de terapia génica antisentido, ya que el generar dicha deleción permite corregir el marco de lectura en la mayor cantidad de pacientes con DMD. De esta manera podría tratarse el 45% de todos los DMD con deleciones en el gen de la distrofina diagnosticados en nuestro laboratorio. Se quiere demostrar la importancia del hallazgo y caracterización de deleciones en pacientes con DMD, con el objeto de conocer la alteración que dio origen al fenotipo patológico, para poder acceder en un futuro a la corrección específica del defecto genético de cada afectado en particular.