Caracterización funcional de una putativa amidotransferasa de Plasmodium falciparum

PIANESI T; SCATTOLINI A; MANSILLA M.C.

Rosario

Jornada; II Jornadas de Ciencia y Tecnología de la FBIOyF; 2023

Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmaceuticas

Introducción: Plasmodium falciparum (Pf) es un protozoo parásito causal de la forma más agresiva de malaria. A pesar de que existen tratamientos para esta enfermedad, la efectividad de los mismos va decayendo paulatinamente lo que genera la necesidad de dilucidar nuevos blancos farmacológicos. El ácido lipoico es un cofactor organosulfurado requerido para el funcionamiento de complejos multienzimáticos involucrados en el metabolismo oxidativo, además de ser un potente antioxidante (1). Bacterias Gram positivas, levaduras, tripanosomas y mamíferos utilizan una vía llamada lipoyl-relay para la lipoilación proteica, que utiliza una amidotransferasa para transferir los grupos lipoilo a las diferentes subunidades E2 de los complejos deshidrogenasa (2)., En Pf la lipoilación de estos complejos se vuelve esencial para su supervivencia, tanto en fase hepática como en fase sanguínea de la infección. Recientemente se ha validado como nuevo blanco terapéutico la actividad amidotransferasa en Trypanosoma brucei (3), por lo que se propone identificar la actividad de la proteína homologa (PfLipL2) en Pf y evaluar su potencial como nuevo blanco farmacológico Resultados: Para evaluar la actividad de PfLipL2 se clonó el gen pflipL2 que codifica para la proteína PF3D7_0923600, con homología a lipoato ligasas y amidotransferasas, en el plásmido pLarC1. Este vector permite la expresión de genes en B. subtilis bajo un promotor inducible por xilosa. El plásmido resultante, pAS19, se purificó y utilizó para transformar a una cepa de B. subtilis deficiente en la actividad amidotransferasa (ΔlipL) denominada NM51. Se determinó la complementación de la actividad en medios mínimos expresando PfLipL2, pudiendo observarse una recuperación del crecimiento tanto en medio sólido como en medio líquido en presencia del inductor. Además, se descartó que la proteína pueda catalizar otras reacciones enzimáticas mediante la expresión en diferentes mutantes en las vías de síntesis y utilización de AL. Conclusiones: Pudimos determinar, mediante complementación funcional de una mutante ΔlipL de B. subtilis que la proteína PfLipL2, previamente descripta como lipoiltransferasa, es una amidotransferasa, ampliando la Apicomplexa la presencia del lipoyl-relay.