Estatregias para la producción de bioplásticos a partir de recursos naturales renovables

FRESCURA, JULIETA M; ROJAS, NATALIA L; GHIRINGHELLI, PABLO D

Bernal

Encuentro; 3ra Reunión de Jóvenes Investigadores en Ciencia y Tecnología (3RJICyT); 2018

Universidad Nacional de Quilmes

ResumenEl trabajo se encuentra enmarcado en un proyecto cuyo objetivo es generar una plataforma de producción de poli 3-hidroxipropionato (p(3HP)), un bioplástico con propiedades físicas y mecánicas prometedoras. La estrategia planteada para que el proceso resulte competitivo tanto desde el punto de vista ambiental como tecnológico y económico es su integración a una biorrefinería de glicerol crudo.Para el diseño in silico de la estrategia se utilizaron diversos softwares (Blast, JCat, Clone Manager), considerando las enzimas implicadas en la ruta metabólica, frecuencia de uso de codones, selección del huésped, entre otros. Se llevaron a cabo etapas de clonado molecular mediante protocolos estándar. El diseño se optimizó para la expresión genómica en Pichia pastoris, empleando la ruta metabólica de propionaldehído deshidrogenasa (pduP) que consta de cuatro enzimas, y suma un total de siete subunidades codificadas por genes individuales. De esta manera, se diseñó una poliproteína que consiste en los ORF correspondientes a estas subunidades sin codones de stop e intercaladas con diferentes secuencias codificantes para el péptido auto-procesable T2A. La secuencia nucleotídica codificante para la poliproteína fue sintetizada químicamente en cinco fragmentos, delimitados por sitios únicos de clivaje de endonucleasas que permiten el correcto ensamblado del ORF de la poliproteína, en un sitio de clonado múltiple (MCS) diseñado ad hoc. En primer lugar se obtuvo un plásmido base, y posteriormente se generaron las construcciones con el primer y segundo fragmento del ORF clonados. Así, este trabajo consiste en el diseño de la estrategia y construcciones iniciales para obtener los microorganismos recombinantes productores del biomaterial, comenzando con las manipulaciones genéticas que llevaron a la obtención de los primeros resultados en el tema. En base a estos resultados se continuará con las siguientes etapas de ensamblaje del ORF de la poliproteína, para obtener una cepa de P. pastoris recombinante productora de p(3HP).