FORMACIÓN DE BIOFILM POR MICROORGANISMOS ANAEROBIOS PRODUCTORES DE MIONECROSIS

CELIA NOEMÍ PEREZ; RODRIGO GUERRA; SOFIA QUIROGA; VILLA MARIA CECILIA; PATRICIA STAGNITTA; VEGA EA

Rosario - Santa Fe

Congreso; XVII Congreso y XXXV Reunión Anual 2015; 2015

Sociedad de Biología de Rosario - Círculo Médico de Rosario

La mionecrosis por Clostridium es una infección rara, con frecuencia fatal, como resultado de la invasión y destrucción rápida de tejido muscular.En los seres humanos seis miembros del género clostridial pueden invadir músculo, siendo Clostridium perfringens y Clostridium septicum losresponsables de la mayoría de las infecciones clínicamente relevantes. Esta enfermedad puede ser clasificada como traumática (relacionada conheridas) o no traumática en la que los clostridios acceden por una lesión en la pared de la mucosa del intestino a la sangre. En la producciónganadera C. perfringens es el agente causal de la gangrena gaseosa, la enterotoxemia del ovino y del caprino y C. septicum produce el edemamaligno. Estos microorganismos pueden ser aislados junto a otros clostridios patógenos, principalmente C. chauvoei, agente causante de lamancha. La patogenia de estos microorganismos tanto en humanos como en animales está dada principalmente por las diferentes exotoxinasproducidas. Estos patógenos oportunistas son bacilos Gram positivos, anaerobios y esporulados que se encuentran en el suelo y en la flora normaldel intestino del hombre y animales. El tracto intestinal contiene el ecosistema más densamente colonizado del cuerpo humano en el que losmicroorganismos pueden adaptarse a través de la formación de endosporas o biofilms. Los biofilms bacterianos son comunidades de célulasadheridas a superficies, inmersas en una matriz de sustancias poliméricas extracelulares, ácidos nucleicos y proteínas que ellas mismas excretan.Estudios previos refieren la formación de biofilm de C. perfringens sobre superficies abióticas. Enzimas con actividad neuraminidasa, implicadas enla formación de biofilm en otros patógenos, han sido descriptas en C. septicum y C. chauvoei, sin embargo no existe información sobre laproducción de biofilm en estos microorganismos. El objetivo de este trabajo fue demostrar la formación de biofilm de las cepas C. septicum ATCC12464 y C. chauvoei ATCC 10092 y establecer una relación entre su presencia y la capacidad del microorganismo de producirlo. Además, realizarun estudio cualitativo comparativo con el biofilm de C. perfringens ATCC 3624. Las cepas se cultivaron en placa de Petri con medio optimizadopara anaerobios (MOA) y fue añadida una superficie de vidrio para la adhesión y la formación del biofilm. Se incubaron a 37ºC en anaerobiosisdurante 24, 48 y 72h. Los estudios morfológicos de células sésiles se realizaron por microscopía óptica luego de tinción con cristal violeta. Lacuantificación de la producción de biofilm se realizó en policubetas de poliestireno por medición de absorbancia mediante técnica de cristal violetaa DO 550 nm. Se utilizó la prueba estadística del test de Student, con una significancia del 95% utilizando Graphpad Prism 5.Los resultados pormicroscopía óptica mostraron que el biofilm formado a las 24 y 48h fue significativamente mayor y más homogéneo para C. septicum > C.perfringens > C. chauvoei; mientras que a las 72h fue escaso con formación de cúmulos aislados independientemente de la especie. La mediciónde absorbancia demostró que el biofilm de C. septicum fue significativamene mayor que el obtenido con C. perfringens; mientras que el biofilm deC. chauvoei fue la mitad del formado por C. perfringens a las 48h (p ≤ 0,05). Este es el primer informe sobre la capacidad de formar biofilm de C.septicum y C. chauvoei, lo que explicaría la persistencia de estos microorganismos anaerobios en ambientes intestinales. Estas especiesestrechamente relacionadas (99% de similitud genética) presentaron comportamiento diferente entre ellas y en comparación con C. perfringens