ENRIQUECIMIENTO DE PROTEÍNAS INMUNOGÉNICAS EXTRACELULARES DE Clostridium chauvoeiy Clostridium septicumPOR PRECIPITACIÓN FRACCIONADA CON SULFATO DE AMONIO

SOFIA QUIROGA; MARÍA JULIA DIVIZIA; CELIA NOEMÍ PEREZ; CASERES SC; VILLA MARIA CECILIA

Rosario - Santa Fe

Congreso; XVII Congreso y XXXV Reunión Anual 2015; 2015

Sociedad de Biología de Rosario - Círculo Médico de Rosario

Entre los principales clostridios histotóxicos se encuentran Clostridium chauvoei y Clostridum septicum, ambos patógenos desencadenan cuadros de gangrena gaseosa similares de rápida evolución, con severa toxemia e inevitablemente fatales. C. chauvoei es el agente causal de la mancha, enfermedad mortal que afecta principalmente al ganado bovino y ovino. Recientemente se ha informado su capacidad de producir infección en el humano. C. septicum se asocia generalmente con mionecrosis endógena o gangrena aguda no traumática en el hombre. En animales de sangre caliente produce el edema maligno o gangrena gaseosa traumática. Para el control de la mancha, el edema maligno y otras enfermedades clostridiales se emplean vacunas de formulaciones polivalentes, basadas en cultivos entero-formolados, que no siempre alcanzan un 100% de protección. En animales vacunados se registran brotes de enfermedad que pueden deberse a que no se cumplen adecuadamente los planes de vacunación o a la falta de estandarización de la composición y concentración de los antígenos. Otro problema asociado a la administración de este tipo de vacunas de polivalencia extrema es la aparición de lesiones en el sitio de inyección debido a su alta reactividad. Es cada vez más necesaria la búsqueda de componentes antigénicos que sean efectivos a bajas dosis para ser empleados en las vacunas polivalentes. El objetivo de este trabajo es aportar al mejoramiento de la capacidad inmunoprotectora de vacunas contra la mancha y el edema maligno mediante el enriquecimiento de proteínas extracelularesinmunogénicas de C. chauvoei y C. septicum por precipitación fraccionada con (NH4)2SO4. Se realizó la precipitación fraccionada de proteínas extracelulares inmunoreactivas identificadas por Espectrometría de masas (MALDI TOF) de C. chauvoei ATCC 10092 y C. septicum ATCC 12464 con (NH4)2SO4 al 40, 60 y 75% (p/v). Las proteínas se valoraron por SDS-PAGE y tinción con Coomassie o Plata. A partir de la fracción extracelular de C. chauvoei precipitada con 40% de (NH4)2SO4 se observó la presencia predominante de una proteína de 42 kDa identificada como Proteína de germinación de esporas o Flagelina. Con 60% (NH4)2SO4 se precipitó una proteína de 30 kDa no identificada y con 70% de (NH4)2SO4 se logró el enriquecimiento de las proteínas inmunorreactivas de 130kDa Piruvato Flavodoxina Ferrodoxina Oxidorreductasa, de 107 kDa Proteína de Unión a Carbohidrato, de 94 kDa Aldehído Alcohol Deshidrogenasa, de 42 kDa Proteína de germinación de esporas o Flagelina y de 53 kDa Chaperonina GroEl. A partir de las fracciones extracelulares de C. septicum precipitadas con 40% y 60% de (NH4)2SO4 se logró el enriquecimiento de una proteína inmunorreactiva de 130kDa que se identificó como Piruvato Flavodoxina Ferrodoxina Oxidorreductasa y una proteína inmunorreactiva de 69 kDa no identificada. A partir de la fracción precipitada al 75% se observó la presencia predominante de la proteína de 31 kDa Fructosa Bifosfato Aldolasa (Fba1p) o Beta hidroxibutiril Coenzima A deshidrogenasa dependiente del NAD. La precipitación fraccionada con (NH4)2SO4 permite un enriquecimiento de las proteínas extracelulares inmunoprotectoras, lo cual contribuirá a la formulación de vacunas contra la mancha y el edema maligno de mayor eficiencia y menor reactividad, debido a la utilización exclusiva de inmunógenos de alta capacidad protectora, excluyendo proteínas de baja o nula capacidad inmunogénica.