Efecto de la endometriosis sobre la calidad ovocitaria en un modelo de ratón

KLINSKY LAHOZ O.G.; WETTEN P.A.; SCELTA, J.; FURLAN, M.; SAGEGH F.; MICHAUT, M.A.

Mendoza

Congreso; I Congreso Interuniversitario Mendoza; 2021

Universidad Nacional de Cuyo, Universidad Maza, Universidad Congreso, Universidad del Aconcagua, Universidad Tecnológica Nacional, Universidad Católica Argentina, Universidad Champagnat

La endometriosis es un trastorno ginecológico, inflamatorio y crónico que afecta al 10-15% de las mujeres en edad reproductiva de cualquier etnia y grupo social, y al 50% de las mujeres infértiles en edad reproductiva. Está caracterizada por la presencia de glándulas de tejido de tipo endometrial que se desarrollan fuera de la cavidad uterina y responden a la acción de hormonas ováricas esteroideas. Algunos de los síntomas que genera la endometriosis son dismenorrea, dolor pélvico crónico, relaciones sexuales dolorosas e infertilidad. Entre las posibles causas que reducen la fertilidad en mujeres con endometriosis, se encuentra una posible alteración en la calidad de sus ovocitos. Sin embargo, se desconoce la base molecular de dichas alteraciones. Investigadores reunidos en el último Consorcio Mundial de Endometriosis realizado en mayo de 2014 en Sao Paulo, Brasil, propusieron como una nueva recomendación la necesidad de investigar los efectos de la endometriosis sobre la calidad ovocitaria. Teniendo en cuenta esto, el objetivo general de este proyecto es analizar los efectos de la endometriosis sobre la calidad ovocitaria utilizando para ello un modelo de endometriosis inducida en ratón. Nuestra hipótesis de trabajo es que la endometriosis altera la calidad ovocitaria y, por ende, compromete la fecundación y el desarrollo embrionario. En una primera instancia pusimos a punto una técnica específica para generar endometriosis en ratones hembra de la cepa CF-1. La endometriosis fue inducida experimentalmente por trasplante endometrial homólogo en el peritoneo. Luego de 4 semanas, las hembras fueron estimuladas hormonalmente con el fin de colectar ovocitos maduros a partir de oviducto y analizar la calidad de éstos mediante el estudio de la estructura y funcionalidad de sus organelas. En esta primera etapa, nos enfocamos en analizar el citoesqueleto de actina, los gránulos corticales y la funcionalidad mitocondrial. Para analizar el citoesqueleto de actina, ovocitos controles y provenientes de hembras con endometriosis inducida (endo) fueron fijados y teñidos con un marcador fluorescente de actina. Los resultados mostraron que la actina cortical estaba engrosada en los ovocitos endo en comparación con los ovocitos control. Para analizar si la endometriosis afecta la biología de los gránulos corticales, estudiamos la densidad de estas organelas a través del uso de una lectina fluorescente que tiene afinidad por el contenido de los gránulos corticales. Los resultados mostraron que la densidad de gránulos corticales en ovocitos endo fue similar a los controles. Ante esta observación, y teniendo en cuenta que los gránulos corticales tienen el rol fundamental de evitar la poliespermia durante la fecundación mediante la secreción de su contenido, realizamos un ensayo funcional que permite analizar este proceso. Para esto, los ovocitos controles y endo fueron incubados en presencia de un activador partenogenético -que simula la fecundación- y luego analizamos la densidad de los gránulos corticales, parámetro que permite medir la secreción de los gránulos corticales. Los resultados mostraron que los ovocitos endo tienen disminuida significativamente su capacidad de responder al cloruro de estroncio, en comparación con los ovocitos control. Finalmente, para analizar la funcionalidad mitocondrial evaluamos el potencial de membrana mitocondrial (PMM) y los niveles de ATP para determinar si las vías energéticas celulares estaban alteradas como consecuencia de la endometriosis inducida. Ambos parámetros fueron determinados mediante el uso de sondas fluorescentes comerciales específicas. Los resultados mostraron que no hubo diferencias significativas entre el PMM de ovocitos controles y endo; no obstante, los niveles de ATP fueron significativamente menores en ovocitos endo respecto de los controles. En conjunto, estos resultados preliminares indicarían que la endometriosis inducida altera la calidad ovocitaria en ovocitos de hembras de ratón.