Desarrollo de vacunas heterólogas contra cepas enteropatógenas prevalentes en el Noroeste argentino basadas en mutantes atenuadas de Salmonella

M.F. BALLESTEROS; M.F. TORREZ LAMBERTI; F.E. LOPEZ; M. DE LAS M. PESCARETTI; M.A. DELGADO

San Miguel de Tucuman

Jornada; Jornada JOSIUNT; 2023

Las ETAs de origen bacteriano figuran entre las primeras cinco causas de muerte en menores de 5 años y pacientes inmunodeprimidos. En general, tienen un tratamiento sintomático, reservándose el uso de antibióticospara los casos graves, ya que el mal uso de estos lleva a la selección de cepas multiresistentes a antibióticos. Por ello, el desarrollo de vacunas con microorganismos genéticamente modificados representa una excelenteestrategia para combatirlas, ya que pueden inducir una respuesta inmune efectiva contra patógenos del mismo género y especie (vacunas atenuadas) o contra patógenos filogenéticamente relacionados (vacunasrecombinantes). En nuestro laboratorio hemos obtenido cepas atenuadas en virulencia de Salmonella Typhimurium basadas en el sistema regulatorio RcsCDB, capaces de replicar en células dendríticas e inducir larespuesta inmune del hospedador. Nuestro objetivo fue el estudio y desarrollo de vacunas atenuadas y vectores, activas contra patógenos de mayor incidencia en la población del NOA. Para ello, iniciamos unacolaboración con organismos de Salud Pública de diferentes provincias del NOA, lo que nos permitió aislar, seleccionar y clasificar enteropatógenos (AC) de muestras fecales de pacientes pediátricos con gastroenteritis.Los AC, serotipificados y caracterizados mediante técnicas bioquímicas y moleculares, fueron depositados en nuestro cepario. El análisis epidemiológico demostró que Shigella flexneri 2 es el patógeno prevalente en elNOA. El estudio del perfil de resistencia antibiótica (PRA) reveló que la mayoría de los AC se presentaron como Multidrogas Resistentes (MDR). El contenido plasmídico de los AC de cada PRA, mostró gran variabilidadgenética intra e interespecífica en los AC de Shigella. Esta variabilidad se observó también al estudiaron otros fenotipos (producción de biopelícula y compuestos antimicrobianos, motilidad y virulencia). La secuenciacióncompleta del genomas de dos AC de S. flexneri 2 confirmó la variabilidad intraespecífica, y permitió detectar determinantes genéticos (factores de virulencia) característicos de cada uno, seleccionados para el desarrollode vacunas vectores. Para ello, se realizó el clonado de estos diferentes genes de Shigella en vectores especializados, bajo el control de elementos de la SPI2 de Salmonella cuando replica dentro del hospedador. Estasconstrucciones fueron introducidas en la cepa atenuada, y se está analizando la correcta expresión y secreción de los antígenos recombinantes, para su uso como vacuna vector. Paralelamente, se obtuvieron nuevascepas atenuadas derivadas de las existentes, y se evaluó el grado de protección que confieren al hospedador frente a AC virulentos de diferentes serovares de Salmonella obtenidos. Donde, los AC virulentos de S.Typhimurium y Enteritidis establecieron la infección y muerte de ratones BALB/C (inoculados oralmente) durante la 1ra semana pi. Mientras que, los ratones infectados con las cepas atenuadas sobrevivieron hasta 15días pi, momento en el cual recibieron un 2do desafío con los AC virulentos. Nuestros resultados indicaron que las cepas atenuadas fueron capaces de conferir inmunidad al hospedador frente a AC de S. Typhimurium yEnteritidis. Conclusión, hemos obtenidos resultados satisfactorios sobre el desarrollar vacunas atenuadas activas contra Salmonella, quedando por demostrar que estas cepas pueden expresar antígenos heterólogos ygenerar inmunidad frente a cepas de Shigella, patógeno prevalente en el NOA.