Caracterización in vivo del papel de la fosforilación en Ser-403 del E2F-1 humano

REAL SEBASTIAN; TAULER ALBERT

Malaga

Congreso; XXX Congreso de la Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular; 2007

Sociedad Española de Bioquímica y Biología Molecular

El factor de trascripción E2F-1 posee un papel clave en la progresión del ciclo celular, diferenciación, desarrollo y apoptosis. La actividad transcripcional de E2F1 depende principalmente de su asociación a la familia de RB y de su fosforilación por diferentes quinasas. Resultados recientes obtenido por nuestro Grupo (Garcia-Alvarez, 2007, BBA Mol Cell Research 1773, 375-382) demuestran que la Glicógeno Sintasa Quinasa-3 [beta] (GSK3 [beta] ) puede fosforilar in vitro a E2F-1 en la Ser-403 y Ser 433. Con el objetivo de determinar la existencia de fosforilación in vivo en estos aminoácidos, se ha generado un anticuerpo policlonal contra la forma fosforilada de la Ser-403. La posterior caracterización in vitro del anticuerpo muestra su especificidad sobre la forma fosforilada, mostrando la forma no fosforilada una immunoreactividad mucho menor. Con la finalidad de determinar la existencia de fosforilación in vivo y su valor funcional, se ha generado una línea celular humana U2OS que sobre-expresa la proteína de fusión E2F1-ER. En esta proteína quimérica la actividad transcripcional de E2F-1 esta regulada mediante su localización nuclear por la adición de tamoxifeno. Los resultados obtenidos demuestran la existencia de una fosforilación in vivo de E2F-1 en la Ser-403. Esta fosforilación es mayor en aquellas condiciones en las que se ha adicionado tamoxifeno, sugiriendo una localización mayoritariamente nuclear de la quinasa responsable. La fosforilación se encuentra también aumentada con el tratamiento con doxorubidorixina, agente productor de daño al DNA. Actualmente se esta investigando la participación de la GSK3 [beta] en esta fosforilación así como la de otras quinasas.