Estandarización de un método de extracción de AND para la amplificación del gen COI para la caracterización molecular de especies de dipterous (Sarcophagidae) de la provincial de Misiones

MARTOS YV, INSAURRALDE DR, ZAPATA PD.

Pergamino, Argentina

Congreso; 36º Congreso Argentino de Genética; 2007

SAG

En casos judiciales, una rápida determinación del intervalo post-mortem (IPM) es crucial para la investigación forense. Este es uno de los objetivos principales de la entomología forense. La determinación de las especies se lleva a cabo a través de métodos morfo-taxonómicos, pero también hay técnicas a nivel molecular que pueden actuar como auxiliares de la entomología forense permitiendo la identificación de las mismas. El objetivo del presente trabajo es estandarizar las condiciones de aislamiento de DNA y la amplificación de una región del gen coI para la caracterización molecular de especies (de moscas) regionales de la familia Sarcophagidae. Para la estandarización del método de extracción de DNA se utilizaron  specímenes adultos recolectados en red y cámara de cría macerados en un tubo con nitrógeno líquido. Se ensayaron distintas combinaciones de los detergentes SDS y CTAB en tampón Tris-HCl 100 mM, EDTA 50 mM, ClNa 500 mM y proteinasa K 0,125 mg/ mL dejándose actuar durante toda la noche a 65°C. Para la purificación se utilizaron tres métodos: precipitación salina de proteínas, extracción con solventes y la combinación de ambos. Los métodos que arrojaron una mayor cantidad de ADN fueron los que utilizaban SDS solo o combinado, seguido de una purificación con solventes y precipitación salina. Este método de extracción permitió la amplificación de una región de 276 pb correspondiente a una porción del gen coI mediante cebadores diseñados para Chrysomya rufifacies utilizando 35 ciclos de amplificación a una temperatura de hibridación de 60°C.