Múltiples eventos de Transferencia Horizontal Genética en la adaptación de la cepa ambiental Escherichia coli 4IgSN1 hacia la extrema resistencia a antibióticos

CARRERA PAEZ LAURA; DONIS NICOLAS; VARGAS, CLAUDIA; GONZALEZ MACHUCA ADRIAN; GAMBINO ANAHI SAMANTA; KNECHT CAMILA; CARPIO DIAZ, EDUARDO; PIEKAR MARIA; ALVAREZ, VERONICA ELIZABETH; CENTRON DANIELA; QUIROGA MARIA PAULA

Congreso; 3er Congreso Latinoamericano de Ecología Microbiana; 2023

ISME-LAT

Escherichia coli además de ser relevante en clínica, también puede encontrarse en suelos o ambientesacuáticos donde puede crecer y sobrevivir durante largos períodos. Para ello utiliza diferentesmecanismos que le permiten generar variantes con capacidad de colonizar nuevos nichos como laTransferencia Horizontal Genética (THG). Nosotros evaluamos si el aislamiento del medioambiente E. coli4IgSN1 aislado de un lugar con bajo grado de urbanización, es capaz de adquirir y mantener genesasociados a resistencia a antibióticos (RAM) de importancia clínica. Para ello se realizaron ensayos detransformación, conjugación y mantenimiento de la RAM adquirida. La competencia natural se evaluóusando el plásmido pAO1Bc, portador del gen cassette aadB que otorga resistencia a gentamicina.Luego, E. coli 4IgSN1 transformada con este plásmido fue testeada con ensayos de conjugación usandoaislamientos clínicos secuenciados por Illumina como cepas dadoras que poseen los siguientesplásmidos: i) pDCASG6-NDM (137.269 pb, IncC) portador de bla NDM-1 ; ii) pDCVA3 (IncFII) multirresistenteportador de bla NDM-5 ; iii) pDCCK 1 -KPC (>77.218 pb, IncM1) portador de bla KPC-2 ; y iv) pDCAG-1 (>112.000 pb,IncFII) multirresistente portador de bla CTX-M-15. La comprobación de THG se realizó mediante selecciónantibiótica y PCRs específicas. Luego, se determinó el perfil de sensibilidad a antibióticos de la cepasalvaje, transformante y transconjugantes confirmando que esta cepa fue capaz de adquirir pordiferentes mecanismos de la THG a varios genes de la RAM críticos en la clínica. Para evaluar laadaptación a la extrema droga resistencia de E. coli 4IgSN1 a lo largo del tiempo, se hicieronexperimentos de mantenimiento de cada gen de interés al día 1 y 10 a partir de subcultivos diarios sinpresión antibiótica. Se comprobó que E. coli 4IgSN1 fue capaz de mantener durante 10 días los plásmidosportadores de bla NDM-1, bla NDM-5, bla CTX-M-15 y bla KPC-2 en un ~100%, 86% y 36% respectivamente. Por otro lado,el plásmido portador de aadB adquirido por transformación se perdió en el 100% de las colonias tras 10días de subcultivos. En conjunto estos resultados demuestran la plasticidad genética que tiene una cepaambiental de E. coli con su potencial como reservorio, así como para adaptarse al nicho hostilintrahospitalario.