OPTIMIZACIÓN DE UN NUEVO MÉTODO PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN DESDE SANGRE PERIFÉRICA

ALVAREZ MF; JM MONDACA; MA PALAVECINO NICOTRA; S SIEWERT; I GONZALEZ; MS OJEDA MS

SAN CARLOS DE BARILOCHE

Congreso; OPTIMIZACIÓN DE UN NUEVO MÉTODO PARA LA EXTRACCIÓN DE ADN DESDE SANGRE PERIFÉRICA; 2014

Introducción: La extracción de ADN se realiza paraobtener moléculas con alto grado de pureza y utilizarlaspara PCR. Objetivo: evaluar dos métodos de extracciónde ADN a partir de muestras de sangre para su posteriorempleo en la técnica de PCR. Se utilizó un equipocomercial QIAamp DNA blood Mini Kit (Qiagen) y unprotocolo optimizado en nuestro laboratorio. Métodooptimizado: 500 µl de sangre fueron homogenizados en1000 µl de Buffer de Lisis de globulos rojos, se incubó 10minutos (min) a temperatura ambiente (Tº amb). Todas lascentrifugaciones se realizaron a 12.000 rpm. Se centrifugó10 min., se descartó el sobrenadante y se añadió 1000µl de agua destilada estéril. Se mezcló por inversión, secentrifugó 4 min. Al pellet se le agregó 400 µl de STE,40 µl de SDS al 10% y 10 µl proteinasa K (20mg/ml).Se mezcló y se incubó 20 min. a 60 °C. Se añadieron500 µl de cloroformo isoamílico (24:1) y se mezcló hastaemulsionar las fases. Se centrifugó 10 min. Al sobrenadantese adicionó 40 µl de NaCl 3M, 700 µl de isopropanol frio.Se incubó 20 min. a -20 °C, se centrifugó 10 min. y elprecipitado se lavó con etanol (70 %). Se secó a Tº amb, y sedisolvió en 50 µl de TE. Resultados: La comparación entremétodos no mostró diferencias respecto a la integridad ypureza de los ADNs y resultaron óptimos para PCR, conconcentraciones de 100 a 300 ng/µl para Qiagen y de 1 a50 ng/µl en nuestro protocolo. Conclusiones: El protocolooptimizado es de bajo costo, rápido, óptimo para PCR yno involucra la utilización de fenol para la extracción deADN