Producción de proteínas recombinantes destinadas a la preparación de reactivos inmunoquímicos

LUZ PEVERENGO; ESTEFANÍA PROCHETTO; IVÁN MARCIPAR

2018-01-01

2018-03-01

Enf.Endemicas-Mal de Chagas

Se obtuvieron las proteínas B13, FRA, P2β y Q2 por inducción de clones recombinantes de E. coli desarrollados en el Laboratorio de Tecnología Inmunológica. Las proteínas obtenidas se purificaron mediante cromatografía de pseudo-afinidad empleando una columna de agarosa Ni-NTA (Invitrogen) y luego se corroboró la eficiencia de la purificación mediante corridas electroforéticas en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE). Luego, se realizó diálisis contra el buffer MOPS de conservación de proteínas.La concentración obtenida de cada antígeno se determinó por corridas en SDS-PAGE, en donde se largó junto con las muestras, una curva patrón de albúmina sérica bovina (BSA). El resultado obtenido se analizó con el programa GelAnalyzer 2010. Finalmente se evaluó la antigenicidad de cada proteína mediante un ensayo de ELISA, empleando 4 sueros de pacientes Chagas positivo y 4 sueros de pacientes Chagas negativo. Para ello se sensibilizó la placa con 0,5 ug por pocillo de la correspondiente proteína, los sueros se utilizaron en una dilución 1/100 y se empleó un conjugado anti IgG total humana diluído 1/10000.