EVALUACIÓN DE UNA NUEVA PROTEÍNA RECOMBINANTE QUIMÉRICA EN EL DIAGNÓSTICO DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS MEDIANTE INMUNOAGLUTINACION

LUZ PEVERENGO; VALERIA GARCIA; LUZ RODELES; MIGUEL VICCO; ESTEFANÍA PROCHETTO; IVÁN BONTEMPI; GABRIEL CABRERA; VERONICA GONZALEZ; IVÁN MARCIPAR; LUIS GUGLIOTTA

Santa Fe

Congreso; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2016

En la actualidad, las reacciones serológicas más utilizadas para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas son: HAI, ELISA e IFI. Un método de detección alternativo, es el ensayo de inmunoaglutinación (IA). Los ensayos de IA son ensayos rápidos, fáciles de ejecutar, no requieren aparatos sofisticados ni personal especializado para su realización y permiten la lectura visual del resultado.En este trabajo, se muestran los resultados obtenidos en el proceso de síntesis de complejos látex-proteína basados en partículas de látex carboxiladas (S8C1 y S8C2: densidad de grupos carboxilo de 5,7 y 13 10-7 mEq/cm2 respectivamente) y concentraciones crecientes de una nueva proteína recombinante quimérica de Trypanosoma cruzi (CP3: compuesta por los antígenos TSSAII-MAP-TcD); y su aplicación en ensayos de IA.Inicialmente, se analizó el efecto de la concentración de proteína unida a la superficie de las partículas y la capacidad de discriminar entre sueros controles positivos y negativos para la enfermedad de Chagas previamente clasificados mediante ELISA, así fue como se seleccionaron los látex denominado S8C1 y S8C2 con una concentración de proteína unida de 1,58 mg/m2 y 3,27 mg/m2 respectivamente. Luego, en base a estos resultados, se trabajó con un panel conformado por 10 sueros positivos y 10 negativos, detectando la IA visualmente y por turbidimetría. Mediante turbidimetría, pudimos observar que se obtenían altos valores de absorbancia para sueros positivos con el complejo S8C1-CP3 (1,58 mg/m2), mientras que los valores más bajos para absorbancia de sueros negativos se obtenían con el complejo S8C2-CP3 (3,27 mg/m2). Si bien se logró discriminar entre sueros positivos y negativos, los valores de absorbancia fueron fuertemente afectados por el aspecto del suero (normal, hemolizado, ictérico, lipemico).Visualmente, la IA se hizo visible a los 35-40 segundo de poner en contacto los reactivos, pero se observó que para obtener una diferenciación entre sueros positivos y negativos, el ensayo debería leerse después de los 2 minutos y hasta los 8 minutos. La intensidad de la aglutinación obtenida para los positivos se correlacionó con la intensidad de densidad óptica de ELISA.Se observó que si bien ambos complejos obtenidos permiten en su mayoría ver aglutinación concordando con la clasificación de ELISA, resultó más clara y rápida la aglutinación con el complejo S8C1-CP3 (1,58 mg/m2).