Optimización de un Inmunoensayo de Flujo Lateral para Toxoplasmosis

RUBINOWICZ A; PUJATO, NAZARENA; IRIS MIRABALLES; PEVERENGO LUZ; MARCIPAR, IVÁN; LEANDRO PERETTI

Salta

Congreso; XI Congreso Sociedad Argentina de Protozoología; 2022

Sociedad Argentina de Protozoología

El objetivo de este trabajo es desarrollar Inmunoensayos de Flujo Lateral (IFL) para detección de Toxoplasmosis. El diagnóstico temprano durante el embarazo es crucial para evitar complicaciones. Si es negativo, se deben extremar las medidas de prevención para evitar adquirirla durante la gestación, mientras que si es positivo se debe discriminar si se trata de una infección aguda o crónica. Contar con dispositivos IFL que detecten anticuerpos anti-toxoplasmosis de tipo IgG e IgM resultaría de gran utilidad ya que son simples, rápidos, económicos y portátiles.Se diseñó un test para detectar IgM específicas anti Toxoplasma gondii. En primer lugar, se sintetizaron partículas de oro (AuNPs) de aproximadamente 30 nm a partir de la reducción de Ácido cloroáurico con Citrato de sodio. Las AuNPs se conjugaron por adsorción pasiva a un anti-IgMhum hecho en cabra (anti-IgMhu/AuNPs). El conjugado se depositó sobre membrana Fusion 5 y sobre membranas de nitrocelulosa se dispensaron: i) para la línea control (LC) Ac anti-cabra que reconocerá a los Ac del conjugado; y ii) para la línea test (LT) Homogenato total de T. gondii. Los IFLs obtenidos se enfrentaron a pooles de sueros negativos e IgM positivos. Se estudiaron diferentes estrategias en el ensayo, modificándose buffers de muestra, de pre tratamiento de membranas, concentraciones de muestras y reactivos, entre otros. Las condiciones ambientales y los procesos de secado durante la fabricación son cruciales ya que afectan el fenómeno de capilaridad y el desempeño de los IFLs. Se logró estandarizar el manejo de dichas condiciones lo que se observa con el adecuado revelado de las LCs. Además, se logró la visualización de LTs al procesar muestras positivas, indicando que el test propuesto podría ser útil para la detección de IgM específicas. Sin embargo, resta optimizar las concentraciones de reactivos específicos para lograr señales de mayor intensidad y reproducibilidad en los resultados.