OPTIMIZACIÓN MULTIVARIADA DEL PROCESO DE EXTRACCIÓN DE AMINOÁCIDOS LIBRES EN DISTINTAS VARIEDADES DE LECHUGA

PAMELA Y. QUINTAS; EMILIANO F. FIORENTINI; RODOLFO G. WUILLOUD; ROXANA E. GONZÁLEZ

Córdoba

Congreso; VIII Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de Alimentos; 2022

Ministerio de Ciencia y Tecnología , Gobierno de Córdoba

Los aminoácidos (AAs), como componentes de péptidos, hormonas peptídicas, proteínas estructurales e inmunitarias, son los biorreguladores más importantes involucrados en todos los procesos de la vida junto con los ácidos nucleicos, carbohidratos y lípidos. Debido a su actividad biológica y su amplia distribución como biomoléculas naturales son componentes esenciales de nuestra dieta. Las hortalizas por sus efectos benéficos para la salud, han adquirido en los últimos años, y se prevé que continuarán haciéndolo en el futuro, un papel fundamental como componentes de la dieta diaria y fuente de AAs. Como estimulantes naturales del crecimiento de las plantas, los AAs como metionina, prolina, trionina y glicina, se utilizan ampliamente para mejorar la disponibilidad de los nutrientes, el rendimiento y la calidad de las hortalizas. En base a lo anteriormente expuesto, el objetivo del siguiente trabajo de investigación fue determinar mediante un método rápido, sencillo y eficiente la concentración de AAs en muestras de lechuga de la provincia de Mendoza mediante cromatografía de fase reversa a partir de una microextracción en fase sólida y posterior derivatización. Para ello, se optimizó el método de extracción y cuantificación de AAs mediante cromatografía líquida (UHPLC-DAD). Los AAs (treonina, triptófano, valina, metionina, prolina, leucina, isoleucina, fenilalania, lisina, histidina) fueron derivatizados con cloruro de 9-fluorenil-metoxicarbonilo (FMOC-Cl) en medio básico. Los derivados formados se cuantificaron mediante UHPLC-DAD empleando una columna C18 (2,2 mm d.i. x 7,5 cm, 3 μm); un flujo de 0,40 mL/min en modo gradiente entre solvente A (ácido trifluoroacético, 0,01 %v/v) y solvente B (acetonitrilo). La temperatura de trabajo fue de 40 °C y la longitud de onda de detección de 265 nm. Para la selección de los factores estadísticamente significativos involucrados en el proceso de extracción se empleó un diseño de Placket Burman incluyendo 15 experimentos. Las condiciones fueron las siguientes: 1) solventes de extracción: metanol y buffer borato de sodio; 2) proporción de metanol: 50-80 %(v/v); 3)tiempo de agitación en UTS: 2-8 min.; 4) volumen de solvente extractante: 3-7 mL; 5) velocidad de centrifugación: 10.000-14.000 rpm; 6) temperatura de centrifugación: 4-20 °C; 7) tiempo de centrifugación: 5-15 min. De estos experimentos resultaron significativos las variables proporción y volumen de solventes extractantes. Las variables no significativas se ajustaron a los valores convenientes que fueron: tiempo de agitación en UTS: 2 min; velocidad de centrifugación: 10.000 rpm; temperatura de centrifugación: 20 °C y tiempo de centrifugación: 5 min. Posteriormente, se llevó a cabo el proceso de optimización de las variables significativas mediante análisis de superficie de respuesta, lo cual requirió de 13 ensayos mediante un diseño central compuesto. Una vez obtenidas las superficies de respuesta se evaluó la “función de deseabilidad”, es decir las condiciones óptimas para todas las especies en conjunto. Con este criterio se logró maximizar la deseabilidad a un valor de 0,978. Las condiciones óptimas de extracción establecidas fueron: 50 %(v/v) de metanol y 3 mL como volumen de extracción. Una vez optimizadas las condiciones de extracción se cuantificaron diferentes muestras de lechuga. Los niveles de aminoácidos variaron significativamente entre los distintas cultivares evaluados.