EL SILENCIAMIENTO DE LA ENZIMA UDP-GLUCOSA DESHIDROGENASA FACILITA EL DESARROLLO DE RESISTENCIA A EPIRRUBICINA EN CÉLULAS MDA-MB-231 MEDIANTE LA REGULACIÓN DE LA SÍNTESIS DE ÁCIDO HIALURÓNICO.

VITALE, DAIANA L.; SPINELLI, FIORELLA M.; SEVIC, INA; CAON, ILARIA; DEMARCHI, GIANINA; VALLA, SOFÍA; CRISTINA, CAROLINA; PASSI, ALBERTO; VIGETTI, DAVIDE; ALANIZ, LAURA

Pergamino

Jornada; VI Jornadas de Jóvenes Investigadores de la Universidad Nacional del Noroeste de la Pcia. de Buenos Aires; 2019

Universidad Nacional del Noroeste de la Provincia de Bs. As.

Introducción: La epirrubicina (EPI) es una droga eliminada por unión al ácido UDP-glucurónico, un monosacárido formado por la UDP-glucosa deshidrogenasa (UGDH) y precursor de varios glicosaminoglicanos como el ácido hialurónico (AH) de la matriz extracelular (MEC).Objetivo: Analizar el efecto del silenciamiento de UGDH sobre la respuesta a EPI y la síntesis de AH en las células MDA-MB-231.Metodología: Las células se transfectaron con ARNpi-UGDH y a las 24h se agregó EPI completando 48h. La acumulación de EPI y apoptosis se evaluaron por FACS. La migración se estudió por ensayo de cierre de herida. Los niveles de ARNm de bombas-ABC, VEGF, EGF, LC3 y sintasas de AH se detectaron por RT-qPCR. Cambios en la MEC se analizaron por ensayo de exclusión de partículas. Los niveles de AH y VEGF secretados se estudiaron por ELISA, y p-Akt y β-Catenina por Western Blot. La actividad de la enzima lactato deshidrogenasa (LDH) y el pH de los sobrenadantes se detectaron por ensayos colorimétricos. Resultados: Se observó mayor acumulación de EPI en las células transfectadas con ARNip-UGDH, sin embargo, la apoptosis fue significativamente menor. Observamos una mayor expresión de bombas-ABC, de factores angiogénicos (VEGF, EGF) y de autofagia (LC3). La migración fue significativamente mayor ante el tratamiento con UGDH+EPI. Se detectó un aumento significativo en el área pericelular (MEC), mayores niveles de HAS2-3 y p-Akt luego del tratamiento con UGDH+EPI. La actividad de LDH se incrementó, en línea con la disminución del pH de los sobrenadantes celulares.Conclusión: El silenciamiento de la enzima UGDH aumentó la disponibilidad de EPI en las células tumorales. Sin embargo, observamos un efecto pro-tumoral en respuesta dicho tratamiento: la activación de mecanismos que favorecen la angiogénesis, migración y sobrevida celular. Las células compensaron la carencia de UGDH aumentando la expresión de AH, altamente relacionado con fenotipos tumorales agresivos y la resistencia a drogas.Palabras claves: Cáncer, epirrubicina, resistencia a drogas, ácido hialurónico.