Fluofagos: Una Alternativa Rápida y Económica para la Detección y Determinación de Susceptibilidad a Antibióticos de Mycobacterium tuberculosis en Muestras de Esputo

RONDÓN, LILIANA; URDÁNIZ, ESTEFANÍA; PAYASLIAN, FLORENCIA; POGGI, SUSANA; LATINI, CECILIA; MATTEO, MARIO; PIURI, MARIANA

Congreso; XVIII Simposio Anual de Enfermedades desatendidas; 2017

El diagnóstico actual de la tuberculosis (TB) se realiza por técnicas lentas y laboriosas que llevan desde semanas a meses o con métodos moleculares rápidos, de alto costo y que no permiten discriminar bacterias viables de no viables. La OMS estima que un 40% de los casos de TB no son diagnosticados y por lo tanto no son tratados correctamente. En este contexto existe una necesidad apremiante de métodos diagnósticos rápidos y económicos que combinen sensibilidad, especificidad, bioseguridad, y la determinación rápida de susceptibilidad a antibióticos usados en el tratamiento de la enfermedad y que puedan ser aplicados en centros de atención primaria en países en desarrollo donde la incidencia de la TB es alta. En este trabajo evaluamos el empleo de Fluofagos, bacteriófagos reporteros que codifican para proteínas fluorescentes, para la detección específica y sensible de Mycobacterium spp. viables y la determinación del perfil de susceptibilidad a antibióticos directamente en muestras de esputode pacientes. La aparición de fluorescencia se detectó por microscopía de fluorescencia. En particular, evaluamos el uso de Fluofagos para el diagnóstico de la TB y la determinación de susceptibilidad a rifampicina (RIF), que esindicador de TB multidrogoresistente (TB-MDR). Luego del análisis de 283 muestras de esputo de pacientes con sospecha de la enfermedad, los resultados de sensibilidad y especificidad para la detección de Mycobacterium sppfueron de un 91,98% y 97,92%, respectivamente, y para la determinación de resistencia a RIF de 100% y 98,94%, respectivamente. Estos resultados exponen las ventajas de los Fluofagos como una alternativa para el diagnóstico dela TB activa y la determinación de resistencia a RIF; ofreciendo resultados de forma rápida (48 ? 96 horas desde la toma de la muestra) y a un bajo costo ($0,25 centavos de dólar por determinación) facilitando su implementaciónen países de escasos recursos económicos, requiriendo un mínimo de manipulación de muestras potencialmente patógenas brindando condiciones de bioseguridad al operador. Adicionalmente, evaluamos el uso de los Fluofagos para determinar el perfil de resistencia extendida a nueve antibióticos en aquellas muestras, que empleando métodos de referencia, fueron clasificadas como TB extremadamente resistentes (TB-XDR). Luego de la secuenciación del genoma completo se comparó la relación entre la resistencia genotípica y fenotípica de estos aislamientos TB-XDR.