Caracterización del sistema LKB1/AMPK en el testículo

AGNELLO, A. C.; GALARDO, M. N. L.; RIERA, M. F.; PELLIZZARI, E. H.; CIGORRAGA, S. B.; MERONI, S. B.

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La kinasa activada por AMP (AMPK) es una enzima clave en el control de lahomeostasis energética celular. Es un heterotrímero compuesto por una subunidadcatalítica alfa y dos subunidades regulatorias beta y gama. Esta kinasa es activadapor un aumento en la relación AMP/ATP que conduce a la fosforilación de lasubunidad alfa por kinasas upstream siendo la mas estudiada la LKB1. Previamentehabíamos demostrado la participación de AMPK en los mecanismos involucrados enla producción de lactato en la célula de Sertoli (CS). El objetivo de este trabajo esanalizar la expresión de las isoformas de la subunidad catalítica alfa de AMPK y desu kinasa LKB1 en los distintos tipos celulares que conforman el testículo. Seaislaron CS, células de Leydig (CL) y células germinales (CG) a partir de ratas de20, 60 y 27 días de edad respectivamente. Asimismo se obtuvieron homogenatos demúsculo y de testículo de animales de 20, 30 y 60 días de edad. La expresión de lassubunidades a1 y a2 de AMPK y la de LKB1 se analizó por Western Blot. Ambassubunidades se expresan en CL, CS y CG. La a1 se expresa más en testículo queen músculo mientras que lo contrario ocurre con a2. Se observó que la expresión deLKB1 aumenta con la maduración sexual en testículo pero que tiene muy bajaexpresión en CS lo que sugiere localización en CG. Este resultado sugirió laactivación de AMPK en CS por otra kinasa upstream como la kinasa de calmodulinakinasa (CAMKK). Para evaluar esta posibilidad analizamos el efecto de 4BrA23187,un ionóforo de Ca, sobre los niveles de AMPK fosforilada,. Observamos que elionóforo aumenta en forma tiempo dependiente la activación de la kinasa: 5min: 1.1±0.1; 15min: 2±0.3; 30min: 1.6±0.1 (veces de estímulo vs basal, *p