COMPROMISO DE LA PROTEÍNA QUINASA A EN LA REGULACIÓN DEL INTERCAMBIADOR Na+/H+ EN Trypanosoma cruzi

PEPPINO MARGUTTI, M; REYNA, M; USORACH, M; VILLASUSO, A; RACAGNI, G

San Miguel de Tucumán

Congreso; 3ra Reunión Conjunta de Sociedades de Biología de la República Argentina; 2015

La adaptación de Trypanosoma cruzi, durante su ciclo de vida involucran al ion Ca+ como un componente esencial. Las señales de Ca+ juegan un importante papel sobre la diferenciación de epi- a tripomastigote. El objetivo de este trabajo fue estudiar la participación de reservorios internos en los incrementos de Ca+ citoplasmático en las formas epimastigote de T. curzi durante el estrés hiperosmótico. Manitol provocó alcalinización de las vacuolas acídicas, mientras que en parásitos pre-incubados con el inhibidor del intercambiador Na+/H+ (EIPA), se observó una disminución en la misma, y un aumento significativo en los parásitos tratados con un inhibidor competitivo de fosfodiesterasas (IBMX). El estrés hiperosmóticos indujo liberación de ca+ desde los acidocalcisomas determinado por cambios en la fluorescencia de Fura-2/AM mientras que el pre-tratamiento con EIPA disminuyó la señal del ion. Por otro lado, la liberación de Ca+ inducida por manitol aumentó cuando los parásitos fueron tratados con un activador de PKA (DBAMPc). En contraste, la liberación de Ca+ disminuyó cuando las células se trataron con un inhibidor de PKA (KT520). Mediante ensayos de western blot sobre acidocalcisomas se demostró la presencia del intercambiador Na+/H+. Por ello, inferimos que el estrés hiperosmótico dispararía señles que conducen a la activación de la PIPLC mediada por la liberación de Ca+ de acidocalcisomas, la cual se favorece por la alcalinización de la vacuola a través del intercambiador Na+/H+. Este sería regulado positivamente por fosforilación por PKC y PKA. Estos eventos podrían contribuir en la adaptación del parásito a las condiciones presentes en el recto del intestino del insecto vector y ser pasos claves en el proceso de diferenciación.