El reconocimiento específico de vesículas extracelulares por anticuerpos modula la función de las células inmunes de forma dependiente del receptor para el fragmento Fc de la inmunoglobulina G

OTERO, ADRIÁN; PÉREZ, PAULA SOLEDAD; RUSSO, CONSTANZA; SEERY, VANESA; SANANEZ, INÉS; OSTROWSKI, MATÍAS; ARRUVITO, LOURDES

Buenos Aires

Workshop; Workshop Grupo Argentino de Vesículas Extracelulares; 2023

Antecedentes: Las vesículas extracelulares (VEs) son vesículas de tamaño nanométrico, con membrana lipídica, que intervienen en la comunicación entre células e influyen en condiciones fisiológicas y patológicas. Debido a su capacidad para transferir componentes bioactivos las VE se exploran cada vez más como potencial blanco terapéutico. Sin embargo, aún se desconoce si las VE pueden formar complejos inmunes con anticuerpos (CI) y, en caso afirmativo, qué función podrían ejercer. Objetivo: Determinar las consecuencias funcionales del reconocimiento por anticuerpos de un antígeno presente en la superficie de VE en células inmunes portadoras del receptor para el fragmento Fc de la IgG (FcγR). Métodos: Se utilizaron células de un linfoma de células B (línea celular Ramos) que liberan VEs portadoras de la molécula CD20 y el anticuerpo terapéutico anti-CD20 Rituximab (RTX) para generar CI (EVs+RTX). Las VEs se aislaron mediante la técnica de ultracentrifugación y se caracterizaron por western blot, citometría de flujo basada en microesferas, análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA) y microscopía electrónica de transmisión (TEM). La formación del CI se confirmó mediante citometría de flujo y tinción con proteína A-oro coloidal. Se expusieron neutrófilos purificados a VE y/o CI y se analizó la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS). La citotoxicidad mediada por células NK se evaluó sobre las células blanco K562 en presencia de VE y/o CI mediante citometría de flujo. Resultados: Las EVs purificadas, derivadas de células Ramos, presentaban las características propias de EVs, es decir, estructura en forma de copa en microscopía electrónica, enriquecimiento para proteínas marcadoras de EVs como ALIX, CD63, CD81, HLA-DR y CD107a y una distribución de tamaño de 90,53 ± 27,01 nm. Es importante destacar que las EVs también portaban la proteína CD20, molécula marcadora de células B reflejando la expresión de esta proteína en las células parentales. Confirmamos que estas EVs, tras su exposición al anticuerpo terapéutico anti-CD20, formaban complejos inmunes, como revelaron la inmunomarcación con oro coloidal (n=1) y la citometría de flujo basada en microesferas (n=5). También observamos que la exposición a las VE promovió la producción de ROS, tanto espontánea como inducida por PMA, en los neutrófilos (p