Estudio Diferencial de la Expresión de Metaloproteasas de Matriz (MMPs) y sus Inhibidores (TIMPs) en los Cuernos Uterinos de Llama

BARRAZA DANIELA E.; ZAMPINI, RENATO; APICHELA, SILVANA A.; MICELI DORA C.; ARGAÑARAZ, MARTIN E.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Jornada; IV Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal. INITRA.; 2014

INITRA

METALOPROTEASAS DE MATRIZ (MMPs) Y SUS INHIBIDORES (TIMPs) EN EL CUERNO UTERINO IZQUIERDO Y DERECHO DE LLAMA. BARRAZA DS 1,2, ZAMPINI R1,2, APICHELA SA 1,2, MICELI DC 1, ARGAÑARAZ ME 1,3.1 Instituto Superior de Investigaciones Biológicas (CONICET?UNT). San Miguel de Tucumán. 2 Facultad de Agronomía y Zootecnia. UNT 3 Facultad de Bioquímica, Química y Farmacia. UNT. E-mail: mearganaraz@fbqf.unt.edu.ar En camélidos sudamericanos el 98% de las preñeces ocurren en el cuerno uterino (CU) izquierdo independientemente de en cual ovario se haya producido la ovulación. Las causas de la receptividad uterina no se conocen en detalle, pero se piensa que podría estar relacionada a la pérdida componentes que previenen e inhiben la implantación, a la adquisición de ligandos o receptores que faciliten la aposición y la adhesión del embrión. En mamíferos las MMPs intervienen en la remodelación de matriz extracelular que ocurre durante el proceso de implantación. Es por ello que el objetivo de este trabajo es conocer si los CUs de llama expresan los genes de las MMPs 2 y 9, y los TIMPs 1 y 2. A tal fin, se trabajó CUs de hembras de llama no lactantes, no preñadas pertenecientes al CEA-INTA Abra Pampa (Jujuy, Argentina), el fluido y tejido uterino se almacen a -80 ºC y en RNA later, para ensayos de zimografía y RT-qPCR respectivamente. Para el primero, los CUs y el fluido se ensayaron en geles agarosa-gelatina y se incubaron a 37ºC 48 hs y se revelaron con coomasie blue. Para el segundo, la extracción de ARN se realizó con el kit SV-Total RNA, luego 1 ug de las muestras se retro-transcribieron y se amplificaron los genes de interés (utilizando b-actina como control).En la zimografía de fluido se observaron bandas de actividad gelatinolítica de 88 kDa y otra 62 kDa, mientras que en tejido de detectaron bandas de 95 y 64 kDa. Las bandas de 64-62 kDa corresponderían a la MMP2, mientras que la de 95 y 88 kDa a la pro-MMP9 y a la MMP9, respectivamente; siendo mas intensa la actividad de la MMP2. Mediante RT-qPCR se detectaron los 4 genes estudiados (MMP2, MMP9, TIMP1 y TIMP2), no encontrándose diferencia significativa entre CU izquierdo y derecho. Los CU