Expresión diferencial de ciclinas en células pluripotentes humanas y en su progenie diferenciada a linaje neural

MARÍA SOLEDAD RODRIGUEZ VARELA; VERÓNICA ALEJANDRA FURMENTO; GUILLERMO A. VIDELA RICHARDSON; NICOLAS A. DIMOPOULOS; SANTIAGO G. MIRIUKA; GUSTAVO E. SEVLEVER; MARÍA E. SCASSA; LEONARDO ROMORINI

Congreso; LX Reunión Anual. Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015

Las células madre pluripotentes humanas (CMP), embrionarias o inducidas,  presentan un ciclo celular atípico donde lafase G1 se encuentra abreviada y los puntos de control ausentes. La progresióndel ciclo celular de una fase a la otra está regulada por las actividades delos complejos quinasas dependientes de ciclinas (CDK/ciclinas). En célulassomáticas, las ciclinasexhiben una expresiónperiódica y altamente regulada a través del ciclo celular.Existen controversias acerca de la expresión periódica de estas proteínas encélulas pluripotentes. Se ha propuesto que la expresión constitutiva de ciertasciclinas podría ser la responsable de la estructura atípica del ciclo celularque éstas exhiben. En este trabajo determinamos por citometría deflujo que las CMP presentan una población celular de fase S de 43,5±12%,mientras que su progenie diferenciada a linaje neural (Nestina+, Neurofilamentoliviano+, Doblecortina+) una de 9,2±0,7% similar a la presenteen fibroblastos (10%). A su vez, estudiamos los niveles de expresión de ciertasciclinas a lo largo del ciclo en CMP y en neuroprogenitores (NP). Mediante RT-qPCRdeterminamos que a diferencia de células somáticas (fibroblastos) las CMP expresanaltos niveles del ARNm de ciclina D2 y bajos de ciclina D1 y D3. Además,observamos que éstas exhiben altos niveles de los transcriptos de las ciclinasE1, A2 y B1. Los NP presentan un perfil de expresión similar al de las CMP delas que derivan, con excepción de los ARNm de ciclina D2 y E1 los que seencuentran significativamente reducidos. Para determinar si las ciclinasanalizadas se expresan de forma periódica sincronizamos a las células en G1/S conPD0332991, inhibidor específico de CDK4/6 (30h 5µM para CMP y 24h 1µM para NP) yen G2/M con nocodazol (24h 100ng/ml para CMP y 54h 200ng/ml para NP). Análisisde RT-qPCR revelaron diferencias significativas en los niveles de expresión delos transcriptos de ciclinas sugiriendo un perfil de expresión periódico.