Caracterización de la respuesta celular frente al daño doble cadena en el ADN en células pluripotentes humanas y progenitores neurales derivados de células madre embrionarias humanas

NICOLAS A. DIMOPOULOS; CAROLINA P. GARCIA; GUILLERMO A. VIDELA RICHARDSON; DAMIAN D. FERNANDEZ ESPINOSA; LEONARDO ROMORINI; SANTIAGO G. MIRIUKA; GUSTAVO E. SEVLEVER; MARÍA E. SCASSA

Congreso; LX Reunión Anual. Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2015

Las células madre embrionarias(CME) deben mantener la integridad de su genoma en respuesta al daño al ADNpara proteger así la vida del organismo en desarrollo. Los daños de doble cadenaen el ADN (DSBs) constituyen una de las formas más deletéreas de daño celular.Fallas en la reparación de los mismos pueden conducir a inestabilidad genómica,muerte celular o cáncer. Al presente, los mecanismos involucrados en lareparación de los DSBs en CME humanas (CMEh) no se hallan del todo esclarecidos.En este trabajo caracterizamos la respuesta de CMEh, células madrepluripotentes inducidas (iPSC) y progenitores neurales (PN) derivados de CMEh alos DSBs generados por el inhibidor de la topoisomerasa I, camptotecina (CPT).Inicialmente, observamos que las CMEh y las iPSCs son hipersensibles a estegenotóxico. Mediante ensayos de inmunofluorescencia y Western blot determinamosque la presencia de CPT conlleva activación de ATM (Ataxia telangiectasiamutada), fosforilación de la histona H2AX en la serina 139 y de la proteína p53en las serinas 15 y 46. Asimismo, observamos que la hipersensibilidad al CPT sereduce notablemente al bloquear farmacológicamente la translocación de p53 a lamitocondria. Además, evaluamos el efecto de la CPT en células con mayor gradode diferenciación (PN). Estos precursores fueron derivados a partir de CMEhexpuestas a un protocolo específico de diferenciación neuronal. En este caso,observamos que los PN son menos sensibles a la CPT. Esta disminución en lasensibilidad podría deberse, al menos en parte, a los cambios en la estructura delciclo celular, a la inducción del inhibidor de quinasas dependientes deciclinas, p21Waf1y a la mayor expresión del factor anti-apoptótico Bcl-2 queéstos exhiben. En los 3 tipos celulares estudiados la CPT activó mecanismosapoptóticos que fueron evidenciados por pérdida de adhesión, encogimientocelular, activación de las caspasas-9 y 3, clivaje de PARP y aparición de oligonucleosomasen el citoplasma.