Virus de la leucosis bovina: Ensayos de la dosis minina infectada y de la neutralizacion in vivo en el modelo ovino

NATALIA PORTA; SUAREZ ACHILLA; ALVAREZ IRENE; KARINA TRONO

Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argertino de Virologia; 2017

Porta N, Suarez Archilla, Alvarez I, Trono k.Virus de la leucosis bovina: Ensayos de la dosis minina infectada y de la neutralizacion in vivo en el modelo ovino.Los ensayos de infectividad in vitro con el Virus de la Leucosis Bovina (BLV) son poco reproducibles y no se usan de rutina en el laboratorio. Los ovinos desarrollan la infección experimental, resultando un modelo muy útil para obtener información concerniente a la inmunidad, persistencia viral y patogénesis del BLV. En este trabajo, nos propusimos optimizar el modelo de infección experimental con BLV en ovinos, determinando la dosis mínima infectiva y la capacidad neutralizante in vivo. Se utilizó como fuente de virus la línea celular FLK, persistentemente infectada con BLV que expresa virus en forma constitutiva y lo libera al medio extracelular. Para determinar la dosis mínima se inocularon cantidades decrecientes de virus libre de células (1/10 a 1/10000) y células FLK viables (5000 a 50). Para el ensayo de neutralización se inoculó sobrenadante libre de células previamente incubado con suero bovino positivo (Título 1/128) y negativo en distintas relaciones (1+1, 1+2 y 1+4). Se inocularon por vía subcutánea 2 corderos (n=2) por muestra en estudio. Se tomaron muestras de sangre entera y de plasma de los ovinos inoculados a los 0, 30 y 60 días. Se determinó la presencia de anticuerpos por ELISA, y de virus/provirus mediante nested-PCR (nPCR). También se analizaron los inóculos mediante nPCR. El sobrenadante libre de células resultó infectivo hasta la dilución 1/1000 (2/2). En el caso de las células, 5000 fueron necesarias para generar la infección en los dos corderos y 500 células resultaron infectivas en 1/2 corderos inoculados. Se observó actividad neutralizante cuando se inoculó el sobrenadante libre de células en presencia de suero positivo a BLV en relación 1+4 (0/2), 1+2 (0/2) y 1+1 (1/2). En cambio, los ovinos se infectaron cuando se inocularon con virus libre de células en presencia de suero negativo en relación 1+1 (2/2), 1+2 (2/2) y 1+4 (1/2). La mezcla 1+4 provocó la infección en un tiempo retrasado con respecto a las otras mezclas. Con respecto a los inóculos se detectó ARN viral hasta una dilución 1/1000 del sobrenadante libre de células, y en ninguno de los inóculos con células. Se detectó ADN proviral en el virus libre de células 1/10 y en el inóculo correspondiente a 5000 células viables. Se avanzó en la optimización del modelo ovino para infecciones experimentales con BLV. Los anticuerpos anti BLV presentes en un suero de campo mostraron capacidad neutralizante e inhibieron el desarrollo de la infección experimental. Es posible que los componentes del suero en alta concentración reduzcan la infectividad del BLV por un efecto toxico, retrasando la detección de la infección tal como se observó en los animales inoculados con la mezcla virus libre de células con suero negativo en relación 1+4. El modelo de infección experimental, permitirá realizar ensayos de neutralización y/o interferencia de BLV, en proyectos que propongan el análisis fUNCional de anticuerpos