Analisis de expresion de genes del hospeddor potencialmetne involucrados en el nivel de carga roviral con el virus dela leucosis bovina

PETERSEN MARCOS; CARIGNANO HUGO; SUAREZ ARCHILLA, GUILLERMO; ALVAREZ IRENE; KARINA TRONO; MIRETTI, MARCOS M.

valle hermoso-cordoba

Simposio; XXXVIII reunion cientifica anual de la SAV; 2018

sociedad argentina de virologia

El Virus de la leucosis bovina (BLV) es un δ-retrovirus que infecta de manera persistente a los linfocitos B de bovinos, en la mayoría de los cuales, la infección transcurre de manera asintomática, pero un 5 al 10% de los animales infectados desarrollan linfosarcoma y mueren, generando así importantes perdidas económicas en el sistema productivo. Debido a su integración al genoma bovino, el potencial de transmisión es mayor en un animal que desarrolla una alta carga proviral (ACP) que en uno con baja carga proviral (BCP). El nivel de CP en un animal infectado está determinado por múltiples causas, siendo la variabilidad genética del hospedador un factor potencialmente relevante. De acuerdo con esto, en un estudio de asociación de genoma completo (GWAS) realizado por nuestro grupo de trabajo, se observó que ciertos polimorfismos de nucleótido simple (SNPs) se encuentran significativamente asociados a un fenotipo de ACP en bovinos infectados por BLV. El objetivo de este trabajo es evaluar si genes ligados a SNPs significativamente asociados con el nivel de CP se encuentran diferencialmente expresados en individuos infectados con BLV de BCP y ACP.Para ello se tomaron muestras de sangre entera de 15 vacas naturalmente infectadas del tambo experimental de la Estacion Esperimental Agropecuaria Rafaela de INTA, previamente caracterizadas, cuyas células blancas se separaron en el día y se conservaron para evitar cambios en la población de ARN mensajeros. Un grupo (n=7) mantuvo siempre un alto porcentaje de reactividad (R) de anticuerpos en sangre; mientras que otro (n=8) presentó consistentemente una baja R. El nivel de carga proviral fue determinado mediante qPCR. Todos los animales de alta R tuvieron ACP, en tanto que los de baja R mostraron una BCP o indetectable. El nivel de expresión génica relativo fue medido en 3 genes candidatos (BoLA-DRB3, PRRC2A y TNF), utilizándose RPLP0 y B2M como genes de referencia.Los cebadores utilizados para la amplificación de los genes candidatos fueron diseñados sobre secuencias depositadas en base de datos públicas. La reacción de qPCR se realizó basada en SYBR Green y los datos crudos de fluorescencia se analizaron en el programa LinRegPCR, que calcula un valor de fluorescencia inicial (N0) a partir de la eficiencia y la línea de base estimada de la curva de amplificación de cada muestra. Los valores N0 fueron normalizados al valor de la media geométrica entre los 2 genes de referencia, y este fue utilizado para calcular el fold change (FC) de cada gen candidato entre los grupos.El análisis de los resultados arrojo que las diferencias en el nivel de expresión entre animales de ACP vs BCP estaban por debajo de 2 FC para los 3 genes estudiados. Los p-valores (t-Student) al 5% de significancia para BoLA-DRB3, PRRC2A y TNF fueron del 0,163, 0,083 y 0,142, respectivamente.Si bien no se observaron diferencias significativas este es el primer reporte que evalúa funcionalmente a genes potencialmente implicados en la modulación de la CP en bovinos infectados por BLV.