Evidencia preliminar del Virus de Artritis Encefalitis caprina y el Virus de Maedi-Visna en cobra de San Luis

ALVAREZ IRENE; NATALIA PORTA; TRONO KARINA; RAIA ALEJANDRO; CARLOS ROSSANIGO; DELGADO F; CAROSIO A

San Salvador de Jujuy

Otro; Reunión Cientifica Tecnicas de la AAVLD; 2016

AAVLD

Alvarez Irene, Raia Alejandro, Porta Natalia, Carlos Rossanigo, Delgado F., Trono K. Carosio A.Evidencia preliminar del Virus de la ARTRITIS ENCEFALITIS caprina (CAEV) y el Virus MEADI-VISNA (MVVV) en cobras de San LuisIntroducción Los Virus de la artritis-encefalitis caprina (Caprine ArthritisEncephalitis Virus-CAEV)y Maedi-visna (MVV)son miembros de la familia de los Retrovirus, e infectan ovejas y cabras en forma indistinta. La mayoría de los animales infectados son asintomáticos, solo un pequeño porcentaje desarrollan un síndrome clínico caracterizado por una enfermedad inflamatoria multisistémica que afecta pulmones, sistema nervioso central, articulaciones y glándula mamarias CAEV y MVV pueden ser aislados de tejidosafectadoso de fluidos mediante co-cultivo con células susceptibles por detección de efecto citopático (ECP) característico y posterior confirmación por inmunomarcaje y/o biología molecular. El objetivo de este trabajo fue realizar el aislamiento del virus CAEV/MVV mediante cultivo celular a partir de muestras de cabras de la provincia de San Luis con sintomatología clínica compatiblecon Artritis-encefalitis caprina.Materiales y métodos. Se realizaron ensayos deinoculación de cultivos celulares con el objeto de detectar CAEV/MVV a partir de diferentes muestras de dos cabras (nro.29 y nro.88) con sintomatología compatible de Artritis-encefalitis caprina y serología positiva, pertenecientes a un rodeo de la provincia de San Luis. Para esto, monocapas subconfluentes de células de la línea GSM (membrana sinovial de cabra) fueron inoculadas con líquido sinovial, linfocitos de sangre periférica y homogenatos de membrana sinovial, glándula mamaria, linfonódulo mamario y pulmón de ambas cabras. Se observó diariamente la presencia de efecto citopático (ECP) característico durante 10 días. Los cultivos fueron pasados en forma ciega. Aquellos cultivos donde se observó la presencia de efecto citopático fueron sometidas a unensayo dePCR puesto a punto en nuestro laboratorio (según Olech y col. 2012), con el objeto de detectar la presencia de fragmentos genéticos específicos virales. Todas las muestras originales inoculadas en células GSM fueron evaluadas antes de ser inoculadas por el mismo ensayo de PCR para detectar la presencia de material genético de CAEV/MVV.Resultados Cuando se realizó el co-cultivo decélulasGSM con los diferentes tejidos de ambas cabras, se observó un ECP compatible con infección por CAEV/MVV en el segundo pasaje del líquido sinovial y en menor medida de las muestras de PBMC. Esta observaciónfue concordante con la detección de RNA específico de CAEV/MVV en los lisados de células de los co-cultivos de las muestras antes mencionadas. Además, se detectó RNA viral en los homogenatos crudos de membrana sinovial y glándula mamaria de la cabra 29. Se detectó DNA proviral solo en el homogenato de membrana sinovial de la cabra 29. Almomento de la escritura de este resumen, se están realizando nuevos pasajes ciegos de cada uno de los co-cultivos de células GSM con los diferentes tejidos, así como amplificando los pocillos donde se detectó ECP. Los cultivos deben ser pasados varias veces antes de ser declarados negativos.Conclusiones Losresultadospreliminaresobtenidoshasta el momento,aportan información preliminar sobre el la detección de CAEV/Maedi Visna en Argentina. Muchos más ensayos son necesarios para confirmar el hallazgo, y obtener evidencia de identificación y caracterizaciónviral especifica.Para esto, lasmuestras positivas en el ensayo de PCR estánsiendo secuenciadaspara establecer el genotipo de la cepa en aislamiento, y de esta forma comenzar a juntar evidencias de cepas que circulan en nuestro país. Este trabajo, es un primer paso para comenzar a conocer la situación de la enfermedad producida por CAEV/MVV en Argentina y para poner a punto métodos diagnósticos que permitan establecer medidas rápidas de control de la infección para evitar su diseminación.Nota: Por ser la Artritis-encefalitis caprina una enfermedad de denuncia obligatoria, la misma fue comunicada al SENASA local (San Luis). Las muestras utilizadas fueron obtenidas en la necropsia realizada por SENASA en conjunto con EEA de San Luis.