Parámetros de evaluación de la maduración de ovocitos porcinos in vitro

GABRIEL MARTIN ALVAREZ; GABRIEL CARLOS DALVIT; MARÍA VERÓNICA ACHI; MARCELO SERGIO MIGUEZ; PABLO DANIEL CETICA

Buenos Aires, Argentina

Jornada; Terceras Jornadas Científicas y de Actualización Profesional de la Facultad de Ciencias Veterinarias ? U.B.A; 2005

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires

OBJETIVO El presente estudio tuvo por objeto evaluar la maduración de ovocitos porcinos in vitro utilizando diferentes parámetros, así como su relación con el estadio nuclear y la vitalidad de los ovocitos inmaduros. MATERIALES Y METODOS Los complejos ovocito cumulus (COCs) inmaduros se obtuvieron por aspiración de folículos antrales (3-8 mm de diámetro) de ovarios provenientes de cerdas de faena y fueron clasificados bajo lupa estereoscópica de acuerdo a las características del cumulus que rodea al ovocito: A1 ovocitos rodeados por cumulus íntegro, denso y oscuro; A2 ovocitos rodeados por cumulus íntegro, denso y claro; B1 ovocitos rodeados sólo por la corona radiata; B2 ovocitos parcialmente desnudos; C ovocitos totalmente desnudos y D ovocitos rodeados por un cumulus de células picnóticas. La maduración se realizó en medio 199 suplementado con sulfato de gentamicina 50 g/ml, suero fetal bovino 10%, cisteína 0,57 mM, FSH porcina 0,5 g/ml y LH porcina 0,5 g/ml a 39ºC, 5% CO2 en aire humidificado por 48 hs. La expansión del cumulus fue evaluada bajo lupa estereoscópica clasificándose en: expansión total (cumulus claro y ampliamente expandido con células separadas por un abundante material intercelular elástico), expansión parcial (cumulus oscuro y más compacto con escaso material intercelular) y denudación parcial espontánea (ovocitos con pérdida parcial de células del cumulus y con restos de cumulus oscuro y compacto). La presencia del primer cuerpo polar se determinó bajo lupa estereoscópica a 4x. La maduración meiótica se evaluó observando la placa cromosómica en metafase II por microscopía óptica a 400x. La evaluación simultánea de la vitalidad y el estadio nuclear de los ovocitos inmaduros se realizó por microscopía de epifluorescencia mediante una tinción combinada de diacetato de fluoresceína y Hoechst 33342. Las comparaciones estadísticas de los diferentes porcentajes se realizaron por la prueba de Chi-cuadrado. RESULTADOS La evaluación de la expansión del cumulus pudo realizarse únicamente en las clases A, debido a las particularidades del cumulus en las otras clases. No se observaron diferencias significativas entre los porcentajes de COCs que expandieron total (A1 46% y A2 47%) y parcialmente (A1 46% y A2 51%), sin embargo el porcentaje de los que denudaron espontáneamente fue significativamente menor (p