Especies reactivas del oxígeno en la maduración de ovocitos porcinos in vitro

GABRIEL MARTIN ALVAREZ; MATIAS TELLADO; GABRIEL CARLOS DALVIT; MARCELO SERGIO MIGUEZ; PABLO DANIEL CETICA

Buenos Aires, Argentina

Jornada; I Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; 2008

Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal

En estudios previos hemos demostrado que en la maduración in vitro el metabolismo del complejo ovocito-cumulus (COC) porcino depende de las características del cumulus que rodea al ovocito y del estímulo gonadotrófico. Los ambientes in vitro presentan mayor concentración de oxígeno que los in vivo, produciendo un aumento en los niveles de las especies reactivas del oxígeno (ERO). Las ERO pueden producir modificaciones oxidativas que alteran el normal funcionamiento celular. Altos niveles de glutatión inducidos por cisteína serían necesarios para mejorar la maduración del ovocito porcino in vitro y la subsecuente competencia de desarrollo embrionario. El objetivo del trabajo fue evaluar la producción de ERO en los ovocitos de las diferentes clases de COCs inmaduros, su posible variación por la maduración in vitro en presencia o ausencia de gonadotrofinas y el efecto de la adición de cisteína. Los COCs fueron obtenidos por aspiración de folículos antrales (3-8mm) de ovarios provenientes de cerdas de faena y clasificados bajo lupa estereoscópica en A1: cumulus íntegro, denso y oscuro; A2: cumulus íntegro, denso y claro; B1: ovocitos rodeados sólo por la corona radiata; B2: ovocitos parcialmente desnudos. La maduración se realizó durante 48 hs. en medio 199. El nivel de ERO se determinó en ovocitos inmaduros y madurados in vitro utilizando el cociente entre las tinciones 2´,7´ diclorodihidrofluoresceína y diacetato de fluoresceína. La maduración meiótica se determinó por la presencia de la placa cromosómica en metafase II. No se observó diferencia significativa en el nivel de ERO entre los ovocitos provenientes de las diferentes clases de COCs. La producción de ERO de los ovocitos disminuyó debido a la maduración in vitro en todas las clases de COCs (p < 0,05), no observándose efecto por la presencia de gonadotrofinas. La presencia de cisteína en el medio de cultivo produjo una disminución en el nivel de ERO de los ovocitos madurados in vitro (p < 0,05). La producción de ERO en el ovocito sería controlada durante el proceso de maduración in vitro independientemente de las características del cumulus que rodea al ovocito y la influencia gonadotrófica. La adición de cisteína al medio de cultivo sería un factor importante para el control de la producción de ERO en el ovocito durante la maduración in vitro.