Efecto de los factores de crecimiento hematopoyéticos en la apoptosis de las células del cumulus durante la maduración in vitro de ovocitos bovinos

PAMELA CONDE; GABRIEL MARTIN ALVAREZ; JOHAN SMITZ; PABLO DANIEL CETICA; MARTA GENTILE

CABA

Jornada; III Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; 2012

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires

La eritropoyetina (Epo) y el KIT ligando (KITL) son factores de crecimiento cuyas funciones más conocidas están relacionadas con la hematopoyesis. Más recientemente se ha encontrado producción de Epo, KITL y sus receptores en tejido ovárico. El rol de estos factores de crecimiento hematopoyéticos durante la maduración del ovocito es aún incierto. En trabajos previos hemos observado que la presencia de Epo o KITL en el medio de maduración in vitro de complejos ovocito-cumulus (COCs) bovinos no tendría efecto en la maduración nuclear de los ovocitos, sin embargo ejercería un efecto positivo en la maduración citoplasmática de los mismos. Se sabe que las células del cumulus desempeñan un papel nutricio y regulatorio en el proceso de maduración del ovocito. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto de la adición de Epo y KITL durante la maduración in vitro de COCs bovinos sobre el nivel de apoptosis de las células del cumulus que rodean al ovocito. Los COCs se recuperaron de folículos antrales de ovarios de faena y se maduraron en medio 199 + gonadotrofinas a 39ºC y 5% CO2 suplementado con 1) seroalbúmina bovina (BSA, control negativo), 2) BSA + Epo (20 u 80 mU/ml), 3) BSA + KITL (5 o 50 ng/ml), 4) Suero fetal bovino (SFB, control positivo). Luego de 22 horas de incubación los COCs fueron fijados con paraformaldehido 4% durante 1 hora y las células apoptóticas determinadas por la técnica de TUNEL (In Situ Cell Death Detection Kit, Roche). Los datos fueron analizados según Anguita B. et al., 2009 para COCs. La suplementación del medio de maduración in vitro con 5 o 50 ng/ml de KITL disminuyó significativamente el porcentaje de apoptosis en el cumulus respecto a ambos controles (p