Evaluación de la actividad de enzimas claves del metabolismo energético en gametas porcinas

BRUNO VECCHI GALENDA; DENISE DUBOIS; MERCEDES SATORRE; GABRIEL MARTIN ALVAREZ; CYNTHIA GUTNISKY; PABLO RODRIGUEZ; ELIZABETH BREININGER

CABA

Jornada; III Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; 2012

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad de Buenos Aires

En las gametas porcinas, la participación de la vía glucolítica y el ciclo de los ácidos tricarboxílicos en la producción de la energía necesaria para el proceso de fecundación in vitro no ha sido del todo dilucidada. El congelamiento de espermatozoides es un modo habitual de preservar la gameta masculina por largos períodos de tiempo, sin embargo, en esta especie esta metodología es poco eficiente. El objetivo del presente trabajo fue determinar en extractos provenientes de espermatozoides (Z) y complejos ovocitos-cumulus (COCs) porcinos la actividad de enzimas claves de la vía glucolítica (fosfofructoquinasa, PFK) y del ciclo de los ácidos tricarboxílicos (isocitrato deshidrogenasa, IDH y malato deshidrogenasa, MDH). La actividad enzimática se determinó por espectrofotometría en extractos de Z provenientes de semen fresco o criopreservado en pajuelas y en COCs. Para la obtención de los extractos, los Z y los COCs inmaduros se resuspendieron en agua destilada, se sonicaron (4 min, 50%), se centrifugaron (17000xg, 20 min, 4°C) y las actividades enzimáticas se determinaron en los sobrenadantes. Las unidades enzimáticas (U) se definieron en función de cada enzima evaluada. Para la PFK la U se definió como la cantidad de enzima que cataliza la formación de 1 µmol de Fructosa 1,6-bifosfato/min, midiéndose como la oxidación de 2 µmoles de NADH/min. En la IDH y MDH la U se definió como la cantidad de enzima que cataliza la reducción de 1 µmol de NAD/min. Los resultados se expresaron como media ± SD. La actividad de PFK fue 1,4±0,6 y 1,1±0,3 U/1010Z en Z frescos y criopreservados, respectivamente y 2,54±0,6 x10-5 U/COC. Para la IDH fue 0,56±0,28 y 0,0002±0,0001 U/1010Z en Z frescos y criopreservados, respectivamente y 2,7±0,9 x10-6 U/COC. Finalmente, en la MDH se obtuvo una actividad de 10,8±5,7 y 8,9±2,0 U/1010Z en Z frescos y criopreservados, respectivamente y 3,2±0,3 x10-5 U/COC. Los resultados obtenidos en la evaluación de la actividad enzimática contribuyen a establecer la participación relativa de la vía glucolítica y del ciclo de los ácidos tricarboxílicos en las gametas porcinas y su relación con el proceso de criopreservación espermática. El conocimiento de estas variables podría ser aplicado en el proceso de fecundación in vitro en esta especie.