COMPARACIÓN DE LAS TÉCNICAS DE ICSI CONVENCIONAL Y PIEZO-ICSI EN YEGUAS

ALVAREZ, G.; CETICA, P.

CABA

Jornada; I Jornadas Internas de Investigación del INPA; 2022

INPA

El objetivo del trabajo fue comparar la eficiencia de la producción de embriones equinos in vitro mediante las técnicas de fecundación in vitro con ICSI convencional y Piezo-ICSI. Se recuperaron los ovocitos inmaduros por aspiración transvaginal (TVA) a partir de yeguas donantes y se transportaron durante la noche en medio de mantenimiento para embriones (Vigro, Vetoqinol) a temperatura ambiente (aprox. 22 °C). Se maduraron en medio TCM199 con sales Earles (Invitrogen), 10 % de suero fetal bovino (Invitrogen), 5 mIU/ml FSH (Sioux Biochemicals) bajo aceite mineral a 38,2 °C, 5 % CO2 en aire y 100 % de humedad durante 24-28 horas. La fecundación in vitro se realizó con semen congelado-descongelado de padrillo de probada fertilidad resuspendido en GMOPS 10 % FBS. El ICSI y Piezo-ICSI se realizaron en GMOPS 10 % FBS. El desarrollo embrionario fue en medio Global Total (Life Global) con 10 % FBS bajo aceite mineral a 90 % N2: 5 % CO2: 5 % O2 y 100 % de humedad, renovando el medio cada 48 horas. Al día 5 de cultivo los embriones clivados fueron transferidos a medio DMEM/F-12 (Sigma-Aldrich, #D-6421) suplementado con 6 ml/L 1 N NaOH, 2,5 mM glicilglutamina (Sigma-Aldrich), 10 % FBS bajo aceite mineral a 90 % N2: 5 % CO2: 5 % O2 y 100 % de humedad, renovando el medio cada 48 hs. Los porcentajes de formación de pronúcleos (evaluado por la tinción Hoechst 33342) a las 18 horas post fecundación, de clivaje a las 48 horas y de formación de blastocistos a los 7-10 días fueron comparados por la prueba de Chi-cuadrado para datos no paramétricos. El porcentaje de maduración in vitro fue 73,4% (301 ovocitos MII / 410 ovocitos recolectados). Los resultados de fecundación in vitro y desarrollo embrionario se presentan en el siguiente cuadro: ICSIPiezo-ICSIN° ovocitos inyectados5050N° ovocitos con 2 PN (%)34 (68) A43 (86) BA, B diferencias significativas en la misma línea (p