DESARROLLO DE UNA TECNICA DE REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA EN TIEMPO REAL (RT-PCR), CON EVAGREEN COMO AGENTE INTERCALANTE, PARA LA DETECCIÓN DEL VIRUS DEL SINDROME DE LA MANCHA BLANCA (WSSV) EN CRUSTÁCEOS.

QUINTANA, SILVINA; JURQUIZA, VERÓNICA

2016-01-06/2016-12-16

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Biológica

Sanidad animal-Enfermedades de virus

El virus del síndrome de la mancha blanca (WSSV) es uno de los principales patógenos que afectan al camarón y otros crustáceos. La enfermedad es de curso agudo y la tasa de mortalidad puede llegar a ser del 100%; según las normas del Código Acuático de la OIE, en caso de ocurrir, debe ser declarada obligatoriamente. Actualmente, no existen tratamientos terapéuticos disponibles para prevenir o reducir los efectos del virus y la vigilancia como así también, las diferentes metodologías implementadas para su detección brindan apoyo y fortalecimiento a la industria y han sido fuertemente recomendadas. Varios métodos se han desarrollado para detectar el WSSV; desde el año 2010, en el Gabinete de Biología Molecular y Microbiología del INIDEP, se utiliza el kit de diagnóstico IQ2000TM WSSV, basado en la detección del WSSV por la técnica de PCR anidada. En muestras de langostino (Pleoticus muelleri), el kit funciono bien; sin embargo en muestras de camarones (Artemesia longinaris) no fue posible poner a punto el método y se determinó la necesidad de implementar la técnica de RT-PCR (Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real). Por otro lado, el Laboratorio Fares Taie solicitó colaboración al INIDEP para implementar la detección del WSSV en muestras de productos pesqueros utilizados en la alimentación de camarones de cultivo. Considerando el convenio celebrado entre Fares Taie Laboratorio de Análisis y el INIDEP, se acordó realizar un trabajo en colaboración, con el objetivo de desarrollar y optimizar un método de diagnóstico con alta sensibilidad, especificidad y más accesible para la investigación y el diagnóstico de rutina, basado en la utilización de la técnica de RT-PCR con agentes intercalantes. Se aplicó la metodología aprobada por la OIE (2016), para la Enfermedad de la Mancha Blanca, con modificaciones . Se utilizó EVAGreen como agente intercalante y el gen 18s (ADNr) como control interno de amplificación en las muestras analizadas. Los resultados obtenidos demostraron que la utilización de la técnica de RT-PCR con agentes intercalantes permite ofrecer una metodología segura en la detección del WSSV. Este trabajo ofrece una herramienta de diagnóstico validada y optimizada para la detección rápida del WSSV.