HIGH RESOLUTION MELTING: UN MÉTODO RÁPIDO Y EFECTIVO PARA DIAGNOSTICAR AFRICANIZACIÓN EN POBLACIONES DE APIS MELLIFERA

PORRINI, LEONARDO; BRASESCO, CONSTANZA; MAGGI, MATIAS; EGUARAS, MARTIN ; QUINTANA, SILVINA

Mar del Plata.

Congreso; XIV Encuentro Biólogos En Red; 2019

Asociación de Jóvenes Investigadores en Formación (AJIF)

El análisis de la variación en el ADNmt de Apis mellifera ha permitido distinguir subespecies y linajes evolutivos mediante diferentes métodos moleculares; desde RFLP, hasta PCR-RFLP y secuenciación directa. Asimismo, la comparación de medidas automatizadas se ha utilizado para distinguir abejas Africanizadas, con un alto grado de consistencia entre la morfometría del ala y la información molecular. Por lo general este tipo de metodologías demandan cierta experiencia y gran cantidad de tiempo hasta obtener un resultado final. El análisis de fusión de alta resolución (HRM) permite identificar rápidamente estos polimorfismos de secuencia, comparando las curvas de fusión en amplicones cortos generados por PCR en tiempo real (qPCR). El objetivo de este trabajo fue implementar la técnica de HRM en el diagnóstico de Africanización en colonias de A. mellifera de Argentina, utilizando como validación el análisis de morfometría geométrica de ala (MGA). Para la identificación molecular del mitotipo, se extrajo ADN de 57 colonias (1 abeja/colonia) provenientes de 16 provincias distintas, las cuales fueron previamente caracterizadas por morfometría geométrica de ala. En primer lugar, se analizaron por el método de referencia, consistente en qPCRs que amplifican dos regiones relativamente largas (485pb/385pb) del gen mitocondrial del citocromo b (cytb); y luego se diseñaron nuevos cebadores con el fin de amplificar un producto de menor tamaño (207pb) que sirva para el diagnóstico por HRM. Se utilizaron controles positivos para las abejas tanto europeas (EHB) como Africanizadas (AHB) y se obtuvieron secuencias parciales del gen para construir un árbol filogenético a partir de secuencias depositadas en Genebank. De las 57 muestras, 37 fueron clasificadas de origen europeo y 20 de origen africano. La totalidad de las muestras clasificadas por HRM fueron correctamente validadas por MGA, demostrando que esta técnica podría ser implementada para una rápida identificación de mitotipo Africano en muestras de Apis mellifera.