Primera detección molecular de Varroa Destructor Virus-1 (VDV-1) en colonias de Apis mellifera de la provincia de Buenos Aires, Argentina

CONSTANZA BRASESCO ; SILVINA QUINTANA ; VANESA DI GERÓNIMO; MARÍA LAURA GENCHI GARCIA; HERNAN SGUAZZA ; MARÍA EMILIA BRAVI; MARTÍN EGUARAS ; FRANCISCO REYNALDI ; MATÍAS MAGGI

Congreso; IV Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental (IV CAMAyA) - I Jornada de la División de Microbiología General (I MicroGen); 2018

Apis mellifera puede ser infectada por 24 tipos de virus en todo el mundo. La mayoría de estos virus son ARN de polaridad positiva y pertenecen a las familias Dicistroviridae y Flaviviridae. Al igual que el virus de las alas deformes (DWV), Varroa destructor Virus-1 (VDV-1) es vectorizado por el ácaro ectoparásito Varroa destructor aumentando su prevalencia y virulencia en las colonias de abejas. VDV-1 se relaciona estrechamente con DWV, existiendo eventos de recombinación entre ambos. El objetivo de este estudio fue detectar, mediante ensayos de RT-PCR en tiempo real, la presencia de VDV-1 en abejas adultas de colonias de la provincia de Buenos Aires. Se extrajo el ARN total de pooles de 10 abejas adultas, de diferentes colonias de 24 colmenares en 22 localidades de la provincia. Se digirió con DNasa y luego se realizaron reacciones de RT-PCR en tiempo real para detectar la presencia de VDV-1 con cebadores específicos, que generan un producto de amplificación de 204pb, de la región de la poliproteína estructural del genoma del virus. Para confirmar la detección se utilizó un segundo par de cebadores que amplifican 660pb de la proteína helicasa del virus VDV-1. Todos los ensayos de PCR en tiempo real se llevaron a cabo con Evagreen como intercalante fluorescente. Como control interno para verificar la correcta extracción de ARN y la ausencia de inhibidores para evitar falsos negativos se realizó una amplificación de β-actina de A. mellifera. Luego de las amplificaciones, los productos de PCR de VDV-1 fueron purificados y secuenciados para verificar que los mismos correspondieran a la secuencia de VDV-1 analizándolos mediante el software Blast. Los alineamientos más significativos se produjeron con secuencias reportadas del genoma completo del virus detectado en ácaros de los Países Bajos. De las 24 muestras analizadas, 21 (83%) fueron positivas para VDV-1 siendo este el primer reporte de detección de este virus en Argentina, en donde se observa que el mismo se encuentra en altas prevalencias en colonias de A. mellifera de la Provincia de Buenos Aires. Futuros estudios permitirán determinar el impacto de este virus per se, su capacidad de recombinación con el DWV en los colmenares de nuestro país, así como comparar el efecto patógeno de estos recombinantes con DWV y VDV-1.