High Resolution Melting (HRM) como nuevo método de screening de la mutación V617F del gen jak2 en síndromes mieloproliferativos crónicos. Comparación con los métodos de secuenciación y ARMS PCR

QUINTANA S; DI GERÓNIMO V; AGRIELLO E; MARTÍN N; PAGANI F

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La policitemia vera (PV), la trombocitemia esencial (TE) y la mielofibrosis idiopática (MI) son trastornos mieloproliferativos clonales estrechamente relacionados y caracterizados por una proliferación excesiva de una o más líneas mieloides tales como eritrocitos, plaquetas y fibroblastos de la médula ósea. En el año 2005, se identificó en varias de estas entidades una mutación en el gen tirosina quinasa Janus kinase 2 (JAK2). Esta mutación consiste en la sustitución de una G por una T en la posición 1849, resultando en la sustitución en la proteína de una fenilalanina por valina (JAK2 V617F). Es el objetivo de este trabajo determinar la utilidad de la técnica de HRM como método de screening de JAK2 V617F y comparar su sensibilidad y especificidad con la secuenciación y ARMS PCR. Con este fin se realizó extracción de ADN de sangre periférica de 25 pacientes con síndromes mieloproliferativos mediante técnica estándard. Todas las muestras de ADN fueron analizadas por las tres técnicas. Para el análisis de detección de JAK2 V617F por HRM se llevaron a cabo amplificaciones por PCR en Tiempo Real de un fragmento de 180 pb del gen jak2 con el intercalante fluorescente Evagreen. Además se estudió la presencia de JAK2 V617F por la técnica de PCR alelo específica refractaria (ARMS PCR) en Tiempo Real modificada y secuenciación. En este trabajo las técnicas de HRM y ARMS PCR mostraron una sensibilidad del 100% y una especificidad del 87, 5%, mientras que la secuenciación mostró una sensibilidad del 88,8% y una especificidad del 100%. Las técnicas de HRM y ARMS PCR modificada presentaron en dos casos falsos positivos dado a la presencia de SNPs en las cercanías de la posición de JAK2 V617F. En conclusión, la técnica de HRM presenta varias ventajas como método de screening de la presencia de JAK2 V617F, debido a su alta sensibilidad, bajo costo y rapidez (