Caracterización de tumores testiculares de ratones transgénicos mediante microarreglos de proteínas a partir de material microdisecado de tejido fijado en paraformaldehído y embebido en parafina

QUINTANA S,; VENARA M; REY R; SCHOTT C; BECKER KF; CHEMES HE .

Congreso; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

Debido a las modificaciones que produce en su estructura macromolecular, la fijación con aldehídos dificulta la extracción y estudio de expresión de proteínas. Nuestro objetivo fue extraer proteínas inmunoreactivas de tumores testiculares de ratones transgénicos fijados en paraformaldehido y embebidos en parafina para realizar análisis por Western Blot y microarreglos de proteínas. Se comparó la expresión de proteínas asociadas al crecimiento tumoral (EGFR, Ciclina D1, Ciclina D3, AKT, p-AKT, ERK y p-ERK) en extractos de 4 testículos (conteniendo tejido normal y tumoral: TT) con el de microdisecciones de áreas exclusivamente tumorales (TM) provenientes de 7 testículos diferentes. Cortes histológicos de 10 μm se desparafinaron y las áreas de interés se microdisecaron y transfirieron al buffer de extracción (Kit Qproteome FFPE Tissue). La reactividad de las proteínas extraídas se controló con un Western Blot de beta-actina. Los extractos se aplicaron por triplicado a portaobjetos revestidos con nitrocelulosa, se detectaron con anticuerpos específicos y los niveles de expresión se calcularon densitométricamente normalizando a las proteínas totales. La expresión de AKT, p-AKT, ERK y p-ERK fue mayor en TM que en TT (1,73 ± 0,61 vs. 0,95± 0,28; 1,70 ± 0,55 vs. 0,43± 0,12; 1,47 ± 0,52 vs. 0,69± 0,29 y 3,72 ± 1,43 vs. y 0,96 ± 0,32, p< 0,01).Similares resultados se obtuvieron con EGFR y Ciclina D3 (TM: 1,17± 0,37; 1,18± 0,47; TT: 0,36± 0,13; 0,35 ± 0,11, p