DIAGNÓSTICO DE LEPTOSPIRA EN SUERO DE HUMANOS POR PCR EN TIEMPO REAL

RECAVARREN MARIANA; SCIALFA EXEQUIEL; QUINTANA SILVINA

Mar del Plata, Buenos Aires , Argentina

Congreso; LVIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La prueba de referencia recomendada por la Organización Mundial de la Salud (OMS) para el diagnóstico serológico de leptospirosis es la micro aglutinación con Antígenos Vivos de Leptospira (MAT). Esta prueba es altamente específica aunque presenta una sensibilidad limitada en la fase aguda, debido a que los anticuerpos son detectables alrededor de los 7-10 días de la aparición de los síntomas y en general se requiere una segunda muestra de suero para confirmar el caso, lo que retarda el diagnóstico y el tratamiento. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar la técnica de PCR en Tiempo Real para detectar ADN de los serovares más comunes de Leptospira que infectan a humanos a partir de cultivos puros y de 23 muestras clínicas de pacientes en distintas etapas de infección. Se realizó extracción, cuantificación y amplificación del ADN de cultivos puros de Leptospira Canicola, Hardjo, Tarassovi, Grippotyphosa, Hebdomadis y Sejroe por PCR en Tiempo Real y se determinó la sensibilidad la cual fue en promedio de 8 genomas. A partir de muestras de suero de pacientes sospechosos de leptospirosis se determinó por MAT la presencia de anticuerpos y por PCR en Tiempo Real la cantidad de ADN bacteriano. Se realizó un control interno amplificando beta actina humana para chequear la correcta extracción del ADN y la ausencia de inhibidores. De las 23 muestras positivas a leptospirosis por MAT, 13 amplificaron el control interno (corresponden a los días 4 al 16 de evolución de síntomas clínicos) y de esas; solo 7 (el 54%) fueron positivas. El bajo número de muestras aptas para el análisis refleja el problema para el estudio de Leptospirosis por métodos moleculares ya que se requiere un volumen mínimo de suero de 1 ml y las muestras deben transportarse y conservarse refrigeradas. Mediante la técnica de PCR en Tiempo Real se detectó exitosamente ADN de Leptospira a partir de cultivos puros con una alta sensibilidad, y de muestras clínicas en distintas etapas de infección; pudiendo ser usada como complemento del MAT.