Sialilacion selectiva de un hexasacarido unido O-glicosidicamente en las mucinas de trypanosoma cruzi

AGUSTI R; GIORGI M. E; KASHIWAGI G; MENDOZA VM,; GALLO- RODRIGUEZ C; LEDERKREMER RM

Carlos Paz, Argentina

Simposio; XVIII SIMPOSIO NACIONAL DE QUÍMICA ORGÁNICA; 2011

Trypanosoma cruzi, el agente de la Enfermedad de Chagas, expresa en su superficie una enzima de características únicas, capaz de transferir ácido siálico desde los glicoconjugados del huésped hacia las mucinas del parásito.1 Las cadenas O-glicosídicas de estas mucinas están unidas a la proteína a través de una α-GlcNAc y pueden derivarse en dos estructuras conservadas, Galp(β1→4)GlcNAc o Galf(β→4)GlcNAc que son posteriormente ramificadas con varias unidades de Galf oGalp (Figura 1), estando la presencia de Galf relacionada con el grupo al que pertenece la cepa de T. cruzi.2 En nuestro laboratorio, hemos sintetizado los oligosacáridos con Galf yestudiadosu capacidad de comportarse como sustratos en la reacción de trans-sialilación.3En el presente trabajo se realizaron estudios de trans-sialilación del compuesto 1 que posee2 Galp terminales 4 y cuya síntesis se describe en otra comunicación (Kashiwagi et al). La trans-sialilación se llevó a cabo utilizando 3?-sialilactosa como donor de siálico y la enzima recombinante. Por purificación del producto de reacción por columna de intercambio aniónico (AG1X2, forma acetato) se obtuvo 2 cuya estructura se determinó por RMN mono y bidimensional y espectroscopía de masas de alta resolución (ESI-MS). Se encontró que 1 se monosialila en la posición-3 del residuo de galac) tosa unido (β1q→3). Se determinaron sus cponstantes cinéticas y deinhibición, KM eIC50. La sialilación, purificación e incubaciones para los estudios cinéticos se monitorearon por cromatografía de intercambio aniónico de alta resolución (HPAEC-PAD)